Samenvatting Biotechnologie & immunologie (plaatjes/tekst)

Samenvatning Biotechnoloiieninimmunoloiie

Tools voor een biotechnoloog
 Restricte-enzyme
 PCR
 Plasmidennennanderen“vectoren”
 Tentransformerenncellenn

 DetecteenProbenvoornhetnteruivindennvannsequentesn(later)

 NodiienResistente-ienen
 HandiienReporterienen




 RestrictonnandnmodifcatonnofnDNA,n2n6-basenparennsequentesnherkendnenniecleavedndoorn2n
verschillendentypenIInrestrictenenzymen,n2nstrandsnvanndenherkenniissequentesnhebbenndezelfden
sequenten(palindroom)(1nnaarn3).
 EcoR1nmaaktnstckynendsn(staiieredncuts),nEcoRVnkniptnaannbeidenstrandsnvannhetnDNAndirectn
teienoverelkaarn(bluntnends).
EcoR1nennEcoRVnherkennennspecifeken6bpnsequente.

,11.1nRestrictonnEnzymesnandnNucleicnAcidnSeparaton
 nModifcatonnenzymesnenprotectncell'snDNAnfornrestrictonnenzymes
- Chemicallynmodifynnucleotdesninnrestrictonnrecoinitonnsequence
- ModifcatonnienerallynconsistsnofnmethylatonnofnDNA




 Gemodifceerdnmetnmethylases,nmethyliroepenntoeievoeid,nbeschermininrestricitesitenvann
knippenndoornEcoR1nennEcoRV.
 Natuurlijknrol;nbeschermenncelnteiennniet-eiiennDNAn(viral),nzelfescherminincelnteiennrestricten
enzymenenmodifcatenenzymen.
 Restricte-enzymennzijnnontdektninnbacteriënninndenjarenn0 nvannden2 steneeuw.nZenfunctonerenn
bijnbacteriënnalsnbeschermininteienninjectenvannvirus-DNA.nHunnontdekkininleiddentotnden
ontwikkelininvannienetschenmodifcate.

11.3 The Polymerase Chain Reacton




DNAnreplicateninnvitro;namplifcate,nPCRnkannseimentennDNAnkopiërenntotnbiljoennvoud.n
1.nTemplatenDNAniedenatureerdndoornhitte.n(denaturate)
2.nArtfcialnDNAnoliionucleotdenprimersnopnelkenstrandntoeievoeid.n(annealini)
3.nDNAnpolymerasenextentonnvannprimersniebruikmakendnvannoriiinelenDNAnalsntemplate.
4.nIncubatentjd;ntempnomhooi,nstrandniescheiden,ntarietnienen2xnzoveelnaanweziinenz…
1.nTemp.nomlaai,nprimersnhybridiserennmetncomplementairenreiio’snvannnieuwniemaaktnDNA.

, • ApplicatonsnofnPCRe
– Phyloienetcnstudies.
– Surveyinindiferentniroupsnofnenvironmentalnorianisms.
– AmplifyininsmallnamountsnofnDNA.
– Identfyininanspecifcnbacteria.
– Lookininfornanspecifcniene.

 VariatonsnofnPCRe
– ReversentranscriptonnPCRn(RTnPCR).
– CannmakenDNAnfromnannRNAntemplate.
– Usesnthenenzymenreversentranscriptasen.
– QuanttatvenPCRn(qnPCR).
– Usesnfuorescentnprobentonmonitornthenamplifcatonnprocess.

 Specifekenprimers,nhoienannealinisntemp;nPCRnspecifek,nTAQnpolymerasenstabielntotn91niraden
 PCRnvoornamplifcatenkleinenhoeveelhedennDNAnvb.nfossielennennforensisch.

11.4 Essentals of Molecular Cloning
 nMolecularnclonininenisolatonnandnincorporatonnofnanpiecenofnDNAnintonanvectornsonitncannben
replicatednandnmanipulated.




 FraimentnDNAnieisoleerdnennierepliceerd.
 Isolerennbepaalde/iewensteniennvannzijnnoriiinelenlocatenennverplaatsnhetnnaarneennkleinnenn
manipuleerbaarnienetschnelementnzoalsneennplasmidenofneennvirus;nvector.
 ResulteertninnrecombinantnDNA,neennDNAnmolecuulndatnDNAnbevatnvann2nofnmeernbronnen.n
 Wanneerniekloneerdnkanniewenstenienniemanipuleerdnwordennennteruiieplaatstnwordenninneenn
cel.

 Threenmainnstepsnofnienencloninie
1. IsolatonnandnfraimentatonnofnsourcenDNA
2. InsertonnofnDNAnfraimentnintonclonininvector
3. IntroductonnofnclonednDNAnintonhostnorianism