Experiment E: Immunofluorescentiemicroscopie
1) Om het principe van fluorescentie (de wet van Stokes) duidelijk in beeld te krijgen is het handig
een
overzicht te maken van de verdeling van de kleuren (van de regenboog) over een golflengteschaal
die loopt
van 200- 800nm. Geef daarin tevens aan wat het zichtbare gebied is, het UV- en het IR gebied.
2) Over lampen en lichtbronnen van fluorescentiemicroscopen:
A) Bij een van onze fluorescentiemicroscopen (VANOX) wordt als lichtbron een kwiklamp gebruikt.
Dit is een voorbeeld van een gasontladingslamp met een lijnenspectrum. Maak een tekening van
het lijnenspectrum van deze lamp.
B) Zoek op welke lichtbron, met een continu spectrum, eveneens gebruikt kan worden. Geef ook
dat spectrum weer. Waarom gebruiken wij een lamp met een lijnenspectrum?
Men zou een waterstof- of heliumlamp kunnen gebruiken.
, 3). De hierboven genoemde fluorescentiemicroscoop is een voorbeeld van een microscoop met
opvallend licht; een zogenaamde epi-fluorescentiemicroscoop. De weg van de lichtbron tot aan het
oog, inclusief alle belangrijke onderdelen, moeten weergegeven kunnen worden.
4) Fluorochromen:
A) Als label wordt in ons geval FITC gebruikt. Teken het excitatie- en emissie spectrum na en geef
daarin duidelijk de optimale golflentes weer, maar ook de breedte van de pieken. Dit is van belang
voor het uitzoeken van geschikte excitatie en emissie filters.
1) Om het principe van fluorescentie (de wet van Stokes) duidelijk in beeld te krijgen is het handig
een
overzicht te maken van de verdeling van de kleuren (van de regenboog) over een golflengteschaal
die loopt
van 200- 800nm. Geef daarin tevens aan wat het zichtbare gebied is, het UV- en het IR gebied.
2) Over lampen en lichtbronnen van fluorescentiemicroscopen:
A) Bij een van onze fluorescentiemicroscopen (VANOX) wordt als lichtbron een kwiklamp gebruikt.
Dit is een voorbeeld van een gasontladingslamp met een lijnenspectrum. Maak een tekening van
het lijnenspectrum van deze lamp.
B) Zoek op welke lichtbron, met een continu spectrum, eveneens gebruikt kan worden. Geef ook
dat spectrum weer. Waarom gebruiken wij een lamp met een lijnenspectrum?
Men zou een waterstof- of heliumlamp kunnen gebruiken.
, 3). De hierboven genoemde fluorescentiemicroscoop is een voorbeeld van een microscoop met
opvallend licht; een zogenaamde epi-fluorescentiemicroscoop. De weg van de lichtbron tot aan het
oog, inclusief alle belangrijke onderdelen, moeten weergegeven kunnen worden.
4) Fluorochromen:
A) Als label wordt in ons geval FITC gebruikt. Teken het excitatie- en emissie spectrum na en geef
daarin duidelijk de optimale golflentes weer, maar ook de breedte van de pieken. Dit is van belang
voor het uitzoeken van geschikte excitatie en emissie filters.
