Samenvatting Applied Mass Spectrometry
& Pharmaceutical Guidelines
Inhoudsopgave
Les 1: Introduction Mass Spectrometry for GC ....................................................................................... 2
Les 2: Introduction Mass Spectormetry for LC ........................................................................................ 4
Les 3: Karakteristieken Mass Analyzers................................................................................................... 6
Les 4: LC-MS Analyses: Kleine Moleculen ............................................................................................... 8
Les 5: LC-MS analyse van peptiden ......................................................................................................... 9
Les 6: Hoge Resolutie MS met TOF en Orbitrap .................................................................................... 11
Les 7: Eiwitten Kwantificeren met Multiplexed Isobaric Tagging Chemistry ........................................ 12
Les 8: Nano-LC-MS voor Proteomics ..................................................................................................... 13
Les 9: Introduction to Pharmaceutical Guidelines ................................................................................ 14
, Les 1: Introduction Mass Spectrometry for GC
Ionenbron
Ionisatie en fragmentatie van de molecuul ion vind plaats in de ionenbron.
Massa analyzer
In de massa analyzer worden de massa’s gescheiden op massa lading verhouding (m/z) onder invloed
van een magnetisch of een elektrostatisch veld. Bij een enkele lading, is de scheiding alleen
afhankelijk van de massa’s van de ionen. Na scheiding in de massa analyzer gaan de ionen naar de
detector, waar de intensiteit van de verschillende m/z waarden wordt gemeten.
Massa spectrum
Een massaspectrum geeft informatie over het moleculaire gewicht, de elementen compositie, de
brutoformule en functionele groepen.
Exacte massa’s
Exacte massa’s kunnen worden gemeten met hoge resolutie MS, met drie of vier cijfers achter de
komma. Bij lage resolutie MS worden de massa afgerond naar het dichtstbijzijnde hele getal. Deze
massa’s worden nominale massa’s genoemd.
Basispiek
Het meest intense fragment ion is de basispiek. De overige pieken worden geschaald ten opzichte
van deze piek (basispiek = 100%).
Elektronen Ionisatie (EI)
Is een ionenbron voor GC, waarbij ionisatie plaats vind onder vacuüm. De analyten passeren een
bron van elektronen de vanuit een filament ontstaan. De elektronen worden versneld onder invloed
van een elektrisch veld van 70 eV. Als een analyt deze elektronen beam passeert, verliezen sommige
moleculen een elektron:
𝑀 + 𝑒 − → 𝑀.+ + 2𝑒 −
Het proces is inefficiënt: slechts een klein deel word geïoniseerd. Toch worden er genoeg ionen
gevormd, omdat MS zeer gevoelig is en lage concentraties kan meten. Bij EI wordt de M+. gevormd,
met dezelfde massa als het originele molecuul. De moleculair ion piek die wordt gevormd is vaak niet
stabiel bij EI door de hoge hoeveelheid aan energie en valt daarom uit elkaar in fragmenten. Vaak is
er geen moleculaire ion piek zichtbaar waardoor molecuulmassa niet bepaald kan worden. EI geeft
wel veel structuurinformatie doordat er veel fragmentatie optreedt. EI is een harde ionisatie
techniek. Verkregen spectra met EI bij 70 eV lijken zeer erg op elkaar en dus kan er een bibliotheek
worden gebruikt voor vergelijking.
13
C-isotoop
13
C komt ongeveer 1,10% voor t.o.v. 12C. Het aantal C-atomen kan berekend worden met de
𝐼𝑀+1
verhouding van 12C en 13C: 𝑛 = 0,011∗𝐼
𝑀
2
& Pharmaceutical Guidelines
Inhoudsopgave
Les 1: Introduction Mass Spectrometry for GC ....................................................................................... 2
Les 2: Introduction Mass Spectormetry for LC ........................................................................................ 4
Les 3: Karakteristieken Mass Analyzers................................................................................................... 6
Les 4: LC-MS Analyses: Kleine Moleculen ............................................................................................... 8
Les 5: LC-MS analyse van peptiden ......................................................................................................... 9
Les 6: Hoge Resolutie MS met TOF en Orbitrap .................................................................................... 11
Les 7: Eiwitten Kwantificeren met Multiplexed Isobaric Tagging Chemistry ........................................ 12
Les 8: Nano-LC-MS voor Proteomics ..................................................................................................... 13
Les 9: Introduction to Pharmaceutical Guidelines ................................................................................ 14
, Les 1: Introduction Mass Spectrometry for GC
Ionenbron
Ionisatie en fragmentatie van de molecuul ion vind plaats in de ionenbron.
Massa analyzer
In de massa analyzer worden de massa’s gescheiden op massa lading verhouding (m/z) onder invloed
van een magnetisch of een elektrostatisch veld. Bij een enkele lading, is de scheiding alleen
afhankelijk van de massa’s van de ionen. Na scheiding in de massa analyzer gaan de ionen naar de
detector, waar de intensiteit van de verschillende m/z waarden wordt gemeten.
Massa spectrum
Een massaspectrum geeft informatie over het moleculaire gewicht, de elementen compositie, de
brutoformule en functionele groepen.
Exacte massa’s
Exacte massa’s kunnen worden gemeten met hoge resolutie MS, met drie of vier cijfers achter de
komma. Bij lage resolutie MS worden de massa afgerond naar het dichtstbijzijnde hele getal. Deze
massa’s worden nominale massa’s genoemd.
Basispiek
Het meest intense fragment ion is de basispiek. De overige pieken worden geschaald ten opzichte
van deze piek (basispiek = 100%).
Elektronen Ionisatie (EI)
Is een ionenbron voor GC, waarbij ionisatie plaats vind onder vacuüm. De analyten passeren een
bron van elektronen de vanuit een filament ontstaan. De elektronen worden versneld onder invloed
van een elektrisch veld van 70 eV. Als een analyt deze elektronen beam passeert, verliezen sommige
moleculen een elektron:
𝑀 + 𝑒 − → 𝑀.+ + 2𝑒 −
Het proces is inefficiënt: slechts een klein deel word geïoniseerd. Toch worden er genoeg ionen
gevormd, omdat MS zeer gevoelig is en lage concentraties kan meten. Bij EI wordt de M+. gevormd,
met dezelfde massa als het originele molecuul. De moleculair ion piek die wordt gevormd is vaak niet
stabiel bij EI door de hoge hoeveelheid aan energie en valt daarom uit elkaar in fragmenten. Vaak is
er geen moleculaire ion piek zichtbaar waardoor molecuulmassa niet bepaald kan worden. EI geeft
wel veel structuurinformatie doordat er veel fragmentatie optreedt. EI is een harde ionisatie
techniek. Verkregen spectra met EI bij 70 eV lijken zeer erg op elkaar en dus kan er een bibliotheek
worden gebruikt voor vergelijking.
13
C-isotoop
13
C komt ongeveer 1,10% voor t.o.v. 12C. Het aantal C-atomen kan berekend worden met de
𝐼𝑀+1
verhouding van 12C en 13C: 𝑛 = 0,011∗𝐼
𝑀
2
