Minor Medische
Microbiologie Praktijk
Blok 2
Made by: Iris Gülcher
,Inhoudsopgave
Voorbereidende vragen blok 2 ................................................................................................................ 4
Macroscopische Morfologie ................................................................................................................ 4
Basistechnieken ................................................................................................................................... 4
Enten van patiëntenmateriaal ......................................................................................................... 4
Agglutineren objectglasmethode .................................................................................................... 5
Gisten .................................................................................................................................................. 6
Serumproef/kiembuis...................................................................................................................... 6
Nugent score voor Gardnerella vaginalis ........................................................................................ 6
Kleuringen ........................................................................................................................................... 6
Neisser kleuring ............................................................................................................................... 7
Sneltesten ............................................................................................................................................ 7
Legionella urine antigeentest .......................................................................................................... 7
Rota /adeno antigeentest ............................................................................................................... 7
Mycologie Kleuringen .......................................................................................................................... 8
Blankophor P preparaat .................................................................................................................. 8
Oost-Indische inkt preparaat (voor Cryptokokken)......................................................................... 8
Lactophenol cotton blue preparaat (voor cultuurpreparaten) ....................................................... 8
Lactophenol cotton blue preparaat (voor haren) ........................................................................... 8
Technieken/methoden ........................................................................................................................ 8
Kiembuis test ................................................................................................................................... 8
Identificatie van Malassezia furfur .................................................................................................. 9
Rice cream agar plaatjes.................................................................................................................. 9
Macroscopische morfologie op candiselect agar .......................................................................... 10
Auxacolor ....................................................................................................................................... 11
RTT-test ......................................................................................................................................... 11
Identificatie van schimmels ........................................................................................................... 11
Haarperforatie test ........................................................................................................................ 11
Serologie ............................................................................................................................................ 12
TPPA............................................................................................................................................... 12
Macroscopische morfologie .................................................................................................................. 13
Gramnegatieve staaf ......................................................................................................................... 13
Grampositieve kok............................................................................................................................. 13
Grampositieve staafjes ...................................................................................................................... 13
Gramnegatieve kokken ..................................................................................................................... 13
Gist..................................................................................................................................................... 13
Made by: Iris Gülcher
,Korte reeks ............................................................................................................................................ 14
TSI-ureum .......................................................................................................................................... 14
LIA ...................................................................................................................................................... 14
Belangrijk ........................................................................................................................................... 14
Feces inzetten........................................................................................................................................ 15
Campylobacter .................................................................................................................................. 15
Salmonella & Shigella ........................................................................................................................ 16
Agglutineren objectglasmethode .......................................................................................................... 16
Rota /adeno antigeentest ..................................................................................................................... 17
Urine inzetten ........................................................................................................................................ 17
Legionella urine antigeentest ................................................................................................................ 17
Identificatie van schimmels ................................................................................................................... 18
Lactophenol cotton blue preparaat (voor cultuurpreparaten) ............................................................. 18
Te beoordelen schimmels ..................................................................................................................... 19
Nugent score Gardnerella vaginalis....................................................................................................... 23
De identificatie van gisten ..................................................................................................................... 24
Macroscopische morfologie op candiselect agar .............................................................................. 24
Kiembuis test ..................................................................................................................................... 24
Serumproef/kiembuis........................................................................................................................ 25
Te beoordelen gisten......................................................................................................................... 25
RPR ........................................................................................................................................................ 27
Microscopie/Macroscopie weetjes ....................................................................................................... 27
Sputum opmerking ................................................................................................................................ 27
Made by: Iris Gülcher
,Voorbereidende vragen blok 2
Macroscopische Morfologie
1. Aan welke bacteriën denk je in de voorbeelden en motiveer je keuze
*Voorbeeld 1: Escherichia coli
*Voorbeeld 2: Pseudomonas aeruginosa
*Voorbeeld 3: Coagulase negatieve Staphylococ
*Voorbeeld 4: Enteroococcus (enterococcus faecium/faecalis)
*Voorbeeld 5: Streptococcen (b-hemolytisch) of Acanobacterie hemolyticum
2. Waarom wordt de MacConkey-agar (Oxoid CM7b) gebruikt i.p.v. het oorspronkelijk
recept?
MacConkey 7 heeft een andere verhouding dan MacConkey 3. Bij MacConkey 7 is het een
selectieve plaat met geen galzouten en geen kristalviolet (door galzouten worden
grampositieve bacteriën nog steeds geremd) waardoor nog steeds de grampositieve coccen
nog wel worden geremd. De enigste grampositieve coccen die wel groeien zijn de
enterococcus, staphylococcus en hemolytische streptococ B (gist groeit ook als pinpoint
kolonies). https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/CM0115B
3. Wat zijn electieve media?
Deze voedingsbodems zijn zo samengesteld dat de kolonies van bepaalde bacteriën er een
herkenbaar uiterlijk op krijgen (electief), zo kun je op het oog een verdere selectie maken en
de gezochte bacterie herkennen.
https://www.microbiologie.info/selectieve%20en%20electieve%20voedingsbodems.html
4. Wat zijn selectieve media?
In de voedingsbodem zit altijd een remstof die de (meeste) bacteriën (waarop het onderzoek
niet gericht is) ook remt in de groei. Zo wordt het medium selectief, er groeit slechts een
select aantal soorten en bijna alle andere micro-organismen worden onderdrukt.
https://www.microbiologie.info/selectieve%20en%20electieve%20voedingsbodems.html
Basistechnieken
Enten van patiëntenmateriaal
1. Waarom moeten de platen in oplopende volgorde van selectiviteit worden beent?
Je moet eerst de een minder selectieve bodem beënten en daarna op een meer selectieve
bodem. Dit wordt gedaan omdat de ösen tussen de platen door niet gesterilliseerd wordt. Dit
is alleen bij fecesonderzoek zo. Bij andere materialen worden de öses wel uitgegloeid De
feces platen zijn zo selectief dat ze zelfs niet eens geautoclaveerd worden alleen kort
Made by: Iris Gülcher
, opgekookt. Bij selectieve platen zitten er stofjes in de bodems die een remmende werking
hebben op bacteriën. Als je van een lage selectiviteit naar een hoge selectiviteit beënt,
kunnen nog steeds de bacteriën groeien op de platen die ook moeten groeien, terwijl als je
van een hoge naar een lage selectiviteit gaat, je de remmende stofjes meeneemt van de
hoge selectiviteit platen, waardoor je ook bij je lage selectiviteit bijna geen groei hebt van
bacteriën.
2. Waarom moet, bij het enten van een urine op een 2-vaksplaat, eerst de bloedagar worden
geënt? (buiten het feit dat de bloedplaat minder selectief is dan de MacConkey plaat)
Je doet eerst de BA en daar bepaal je het kiemgetal. Van een selectieve plaat doe je nooit
een kiemgetal bepaling. Bij tweede keer gebruik voor enten MaC kan er bv iets meer of
minder vloeistof met de öse meekomen maar dat is niet erg omdat je alleen naar de groei
hoeft te kijken.
3. Waarom is het belangrijk om bij enten van een Thio te zorgen voor zo min mogelijk
luchtbellen?
Omdat de Thioglycolaat-buis methode is bedoeld voor anaerobe bacteriën. Het medium
bevat namelijk 0,075% agar om te voorkomen dat convectiestromen atmosferische zuurstof
door de bouillon voeren. Dit zorgt samen met de aanwezigheid van het reductiemiddel
thioglycolzuur voor een anaërobe omgeving dieper in de buis waardoor anaërobe bacteriën
kunnen groeien. Zodra er lucht bij komt, kunnen de anaërobe bacteriën niet/niet goed
groeien.
https://microbeonline.com/thioglycollate-broth/
4. Waarom mag een Thio niet beent worden wanneer de indicator is verkleurd?
Het is een zuurstof indicator. Dit betekent dat er zuurstof door het heen zit en anaeroben
niet kunnen groeien
https://microbeonline.com/thioglycollate-broth/
Agglutineren objectglasmethode
1. Waarom moet agglutinatie van H-antigenen uit vochtig gedeelte van buis worden verricht?
Flagellen worden alleen gevormd wanneer ze ook gebruikt kunnen worden. Op een agar
kunnen ze niet gebruikt worden. In een vloeistof wel
2. Waarom mag troebel antiserum niet gebruikt worden?
Een troebeling geeft vaak aan dat er een besmetting/groei heeft plaatsgevonden in de
suspensie. Hierdoor kan het zijn dat het antiserum wordt afgebroken, waardoor je
onbetrouwbare en fout negatieve resultaten kan krijgen
3. Waarom moet agglutinatie ook met fysiologisch zout (FZ) worden verricht wanneer slechts
één antiserum wordt gebruikt?
Omdat het fysiologisch zout wordt gebruikt als controle bij de agglutinatie test. Deze
controle laat namelijk zien of er misschien iets mis is met de gebruikte kolonie of niet, want
het is de bedoeling dat er geen agglutinatie ontstaat, maar zodra dit wel ontstaat is er iets
mis. Daarnaast wordt er gecontroleerd op auto-agglutinatie
4. Wat moet je doen wanneer de agglutinatie voor Salmonella negatief is maar de korte reeks
wel verdacht is voor Salmonella?
Koken, zodat het kapsel kapot gaat
Made by: Iris Gülcher
Microbiologie Praktijk
Blok 2
Made by: Iris Gülcher
,Inhoudsopgave
Voorbereidende vragen blok 2 ................................................................................................................ 4
Macroscopische Morfologie ................................................................................................................ 4
Basistechnieken ................................................................................................................................... 4
Enten van patiëntenmateriaal ......................................................................................................... 4
Agglutineren objectglasmethode .................................................................................................... 5
Gisten .................................................................................................................................................. 6
Serumproef/kiembuis...................................................................................................................... 6
Nugent score voor Gardnerella vaginalis ........................................................................................ 6
Kleuringen ........................................................................................................................................... 6
Neisser kleuring ............................................................................................................................... 7
Sneltesten ............................................................................................................................................ 7
Legionella urine antigeentest .......................................................................................................... 7
Rota /adeno antigeentest ............................................................................................................... 7
Mycologie Kleuringen .......................................................................................................................... 8
Blankophor P preparaat .................................................................................................................. 8
Oost-Indische inkt preparaat (voor Cryptokokken)......................................................................... 8
Lactophenol cotton blue preparaat (voor cultuurpreparaten) ....................................................... 8
Lactophenol cotton blue preparaat (voor haren) ........................................................................... 8
Technieken/methoden ........................................................................................................................ 8
Kiembuis test ................................................................................................................................... 8
Identificatie van Malassezia furfur .................................................................................................. 9
Rice cream agar plaatjes.................................................................................................................. 9
Macroscopische morfologie op candiselect agar .......................................................................... 10
Auxacolor ....................................................................................................................................... 11
RTT-test ......................................................................................................................................... 11
Identificatie van schimmels ........................................................................................................... 11
Haarperforatie test ........................................................................................................................ 11
Serologie ............................................................................................................................................ 12
TPPA............................................................................................................................................... 12
Macroscopische morfologie .................................................................................................................. 13
Gramnegatieve staaf ......................................................................................................................... 13
Grampositieve kok............................................................................................................................. 13
Grampositieve staafjes ...................................................................................................................... 13
Gramnegatieve kokken ..................................................................................................................... 13
Gist..................................................................................................................................................... 13
Made by: Iris Gülcher
,Korte reeks ............................................................................................................................................ 14
TSI-ureum .......................................................................................................................................... 14
LIA ...................................................................................................................................................... 14
Belangrijk ........................................................................................................................................... 14
Feces inzetten........................................................................................................................................ 15
Campylobacter .................................................................................................................................. 15
Salmonella & Shigella ........................................................................................................................ 16
Agglutineren objectglasmethode .......................................................................................................... 16
Rota /adeno antigeentest ..................................................................................................................... 17
Urine inzetten ........................................................................................................................................ 17
Legionella urine antigeentest ................................................................................................................ 17
Identificatie van schimmels ................................................................................................................... 18
Lactophenol cotton blue preparaat (voor cultuurpreparaten) ............................................................. 18
Te beoordelen schimmels ..................................................................................................................... 19
Nugent score Gardnerella vaginalis....................................................................................................... 23
De identificatie van gisten ..................................................................................................................... 24
Macroscopische morfologie op candiselect agar .............................................................................. 24
Kiembuis test ..................................................................................................................................... 24
Serumproef/kiembuis........................................................................................................................ 25
Te beoordelen gisten......................................................................................................................... 25
RPR ........................................................................................................................................................ 27
Microscopie/Macroscopie weetjes ....................................................................................................... 27
Sputum opmerking ................................................................................................................................ 27
Made by: Iris Gülcher
,Voorbereidende vragen blok 2
Macroscopische Morfologie
1. Aan welke bacteriën denk je in de voorbeelden en motiveer je keuze
*Voorbeeld 1: Escherichia coli
*Voorbeeld 2: Pseudomonas aeruginosa
*Voorbeeld 3: Coagulase negatieve Staphylococ
*Voorbeeld 4: Enteroococcus (enterococcus faecium/faecalis)
*Voorbeeld 5: Streptococcen (b-hemolytisch) of Acanobacterie hemolyticum
2. Waarom wordt de MacConkey-agar (Oxoid CM7b) gebruikt i.p.v. het oorspronkelijk
recept?
MacConkey 7 heeft een andere verhouding dan MacConkey 3. Bij MacConkey 7 is het een
selectieve plaat met geen galzouten en geen kristalviolet (door galzouten worden
grampositieve bacteriën nog steeds geremd) waardoor nog steeds de grampositieve coccen
nog wel worden geremd. De enigste grampositieve coccen die wel groeien zijn de
enterococcus, staphylococcus en hemolytische streptococ B (gist groeit ook als pinpoint
kolonies). https://www.thermofisher.com/order/catalog/product/CM0115B
3. Wat zijn electieve media?
Deze voedingsbodems zijn zo samengesteld dat de kolonies van bepaalde bacteriën er een
herkenbaar uiterlijk op krijgen (electief), zo kun je op het oog een verdere selectie maken en
de gezochte bacterie herkennen.
https://www.microbiologie.info/selectieve%20en%20electieve%20voedingsbodems.html
4. Wat zijn selectieve media?
In de voedingsbodem zit altijd een remstof die de (meeste) bacteriën (waarop het onderzoek
niet gericht is) ook remt in de groei. Zo wordt het medium selectief, er groeit slechts een
select aantal soorten en bijna alle andere micro-organismen worden onderdrukt.
https://www.microbiologie.info/selectieve%20en%20electieve%20voedingsbodems.html
Basistechnieken
Enten van patiëntenmateriaal
1. Waarom moeten de platen in oplopende volgorde van selectiviteit worden beent?
Je moet eerst de een minder selectieve bodem beënten en daarna op een meer selectieve
bodem. Dit wordt gedaan omdat de ösen tussen de platen door niet gesterilliseerd wordt. Dit
is alleen bij fecesonderzoek zo. Bij andere materialen worden de öses wel uitgegloeid De
feces platen zijn zo selectief dat ze zelfs niet eens geautoclaveerd worden alleen kort
Made by: Iris Gülcher
, opgekookt. Bij selectieve platen zitten er stofjes in de bodems die een remmende werking
hebben op bacteriën. Als je van een lage selectiviteit naar een hoge selectiviteit beënt,
kunnen nog steeds de bacteriën groeien op de platen die ook moeten groeien, terwijl als je
van een hoge naar een lage selectiviteit gaat, je de remmende stofjes meeneemt van de
hoge selectiviteit platen, waardoor je ook bij je lage selectiviteit bijna geen groei hebt van
bacteriën.
2. Waarom moet, bij het enten van een urine op een 2-vaksplaat, eerst de bloedagar worden
geënt? (buiten het feit dat de bloedplaat minder selectief is dan de MacConkey plaat)
Je doet eerst de BA en daar bepaal je het kiemgetal. Van een selectieve plaat doe je nooit
een kiemgetal bepaling. Bij tweede keer gebruik voor enten MaC kan er bv iets meer of
minder vloeistof met de öse meekomen maar dat is niet erg omdat je alleen naar de groei
hoeft te kijken.
3. Waarom is het belangrijk om bij enten van een Thio te zorgen voor zo min mogelijk
luchtbellen?
Omdat de Thioglycolaat-buis methode is bedoeld voor anaerobe bacteriën. Het medium
bevat namelijk 0,075% agar om te voorkomen dat convectiestromen atmosferische zuurstof
door de bouillon voeren. Dit zorgt samen met de aanwezigheid van het reductiemiddel
thioglycolzuur voor een anaërobe omgeving dieper in de buis waardoor anaërobe bacteriën
kunnen groeien. Zodra er lucht bij komt, kunnen de anaërobe bacteriën niet/niet goed
groeien.
https://microbeonline.com/thioglycollate-broth/
4. Waarom mag een Thio niet beent worden wanneer de indicator is verkleurd?
Het is een zuurstof indicator. Dit betekent dat er zuurstof door het heen zit en anaeroben
niet kunnen groeien
https://microbeonline.com/thioglycollate-broth/
Agglutineren objectglasmethode
1. Waarom moet agglutinatie van H-antigenen uit vochtig gedeelte van buis worden verricht?
Flagellen worden alleen gevormd wanneer ze ook gebruikt kunnen worden. Op een agar
kunnen ze niet gebruikt worden. In een vloeistof wel
2. Waarom mag troebel antiserum niet gebruikt worden?
Een troebeling geeft vaak aan dat er een besmetting/groei heeft plaatsgevonden in de
suspensie. Hierdoor kan het zijn dat het antiserum wordt afgebroken, waardoor je
onbetrouwbare en fout negatieve resultaten kan krijgen
3. Waarom moet agglutinatie ook met fysiologisch zout (FZ) worden verricht wanneer slechts
één antiserum wordt gebruikt?
Omdat het fysiologisch zout wordt gebruikt als controle bij de agglutinatie test. Deze
controle laat namelijk zien of er misschien iets mis is met de gebruikte kolonie of niet, want
het is de bedoeling dat er geen agglutinatie ontstaat, maar zodra dit wel ontstaat is er iets
mis. Daarnaast wordt er gecontroleerd op auto-agglutinatie
4. Wat moet je doen wanneer de agglutinatie voor Salmonella negatief is maar de korte reeks
wel verdacht is voor Salmonella?
Koken, zodat het kapsel kapot gaat
Made by: Iris Gülcher
