HOOFDSTUK 1. INLEIDING HEMATOLOGIE.............................................................................................................4
1. Functies van bloed.........................................................................................................................................4
2. Samenstelling van het bloed..........................................................................................................................4
2.1. Bloedcellen.............................................................................................................................................4
2.2. Bloedplasma...........................................................................................................................................4
2.3. Verdeling van bloedcellen in het bloed...................................................................................................4
3. Bloedafname en soorten bloedstalen............................................................................................................4
HOOFDSTUK 2. SOORTEN BLOEDCELLEN...............................................................................................................7
1. WBC – leukocyten..........................................................................................................................................7
1.1. Neutrofielen (40-75%).............................................................................................................................8
1.2. Eosinofielen (1-6%).................................................................................................................................8
1.3. Basofielen (<1%).....................................................................................................................................9
1.4. Monocyten (2-10%)................................................................................................................................9
1.5. Lymfocyten (20-45%)..............................................................................................................................9
1.6. Analyses op WBC..................................................................................................................................10
2. RBC – erythrocyten......................................................................................................................................10
2.1. Morfologie............................................................................................................................................10
2.2. Bloedgroepsystemen.............................................................................................................................11
2.2.1. ABO systeem..................................................................................................................................11
2.2.2. Rhesus systeem..............................................................................................................................12
2.3. Functie van RBC....................................................................................................................................12
2.3.1. Hemoglobine..................................................................................................................................13
2.4. Analyses op RBC....................................................................................................................................13
3. Bloedplaatjes – thrombocyten.....................................................................................................................13
3.1. Morfologie............................................................................................................................................13
3.2. Functie thrombocyten...........................................................................................................................14
3.3. Analyses op thrombocyten...................................................................................................................16
HOOFDSTUK 3. INLEIDING TOT HET IMMUUNSYSTEEM......................................................................................17
1. Niet-specifieke immuunsysteem..................................................................................................................17
2. Specifieke immuunsysteem..........................................................................................................................18
2.1. Start specifieke immuunsysteem..........................................................................................................18
2.2. Humorale immuunsysteem...................................................................................................................18
2.3. Cellulaire immuunsysteem....................................................................................................................18
2.4. Kenmerken specifieke immuunrespons................................................................................................18
3. Immuunrespons met (nt-) specifieke componenten....................................................................................18
HOOFDSTUK 4. ANTIGENEN EN HUN IMMUNOGENICITEIT.................................................................................21
1. Factoren die immunogeniciteit antigeen beïnvloeden.............................................................................21
2. Immuuntolerantie....................................................................................................................................21
1
, 3. Antigeendeterminanten / epitopen.........................................................................................................21
HOOFDSTUK 5. IMMUNOGLOBULINEN - ANTILICHAMEN....................................................................................23
1. Structuur antilichaam..................................................................................................................................23
1.1. Variabele en constante gedeelten.........................................................................................................23
1.2. Hinge region..........................................................................................................................................23
2. Binding antilichaam met antigeen...............................................................................................................23
2.1. Moleculaire basis Ag-Al interactie.........................................................................................................23
2.2. Affiniteit en aviditeit Al-Ag interactie....................................................................................................24
2.3. Kruisreactiviteit.....................................................................................................................................25
3. Verschillende klassen immunoglobulines....................................................................................................25
3.1. Structurele verschillen v verschillende klassen immunoglobulines.......................................................25
3.2. Functionele verschillen.........................................................................................................................26
4. Isotype, allotype, idiotype v antilichaam.....................................................................................................27
5. Monoklonale en polyklonale antilichamen..................................................................................................27
HOOFDSTUK 6. IMMUNOLOGISCHE LABORATORIUMTOEPASSINGEN.................................................................29
1. Agglutinatietechnieken................................................................................................................................29
1.1. Hemagglutinatie....................................................................................................................................29
1.1.1. ABO en Rhesus bloedgroepbepaling..............................................................................................29
1.1.2. Complete en incomplete Al............................................................................................................29
1.1.3. Coombs testen (anti-globuline test)...............................................................................................29
1.2. Latexagglutinatie...................................................................................................................................29
1.3. Bacteriële agglutinatie..........................................................................................................................30
2. Precipitatietechnieken.................................................................................................................................30
2.1. Heidelberger-precipitatiecurve.............................................................................................................30
2.2. Neerslagtechnieken in VL fase...............................................................................................................30
2.3. Neerslagtechnieken in V fase................................................................................................................31
3. Testen obv biologische activiteit..................................................................................................................32
3.1. Complement fixatie test........................................................................................................................32
3.2. Virus neutralisatie test..........................................................................................................................32
3.3. Haemagglutinatie inhibitie test.............................................................................................................32
4. Technieken met gemerkte Al........................................................................................................................32
4.1. Aantonen Ag in vloeibaar media...............................................................................................................32
4.1.1. ELISA : enzyme-linked immunosorbent assay....................................................................................33
4.1.2. Kwantitatieve ELISA............................................................................................................................33
4.1.3.1. Capture ELISA..............................................................................................................................33
4.1.3.2. Competitieve inhibitie assay.......................................................................................................34
4.1.3. EMIT : enzyme multiplied immunoassay technique...........................................................................34
4.1.4. RIA : radio-immunoassay...................................................................................................................36
2
, 4.1.5. Immunofluorescentie.........................................................................................................................37
4.1.6. Chemiluminescente labels.................................................................................................................38
4.2. Aantonen Ag op cellen..............................................................................................................................39
4.2.1. Cellulaire ELISA en FIA....................................................................................................................39
4.2.2. Flow cytometrie.............................................................................................................................40
4.3. Aantonen Ag in weefsels (IMMUNOHISTOCHEMIE)..................................................................................43
4.2.3. Directe methode............................................................................................................................43
4.2.4. Indirecte methode : tweestapsmethode........................................................................................43
4.2.5. Indirecte methode : driestapsmethode..........................................................................................44
4.2.6. Oplosbaar enzyme immunocomplex methode..............................................................................44
4.2.7. (stept)Avidine-biotine methode.....................................................................................................45
4.2.8. Technieken met grote amplificatie v/h signaal...............................................................................46
3
, HOOFDSTUK 1. INLEIDING HEMATOLOGIE
hematologie : ∙ samenstelling + eigenschappen bloed
∙ bloedvormende organen
∙ bloedziekten
1. Functies van bloed
◦ weefsels voorzien van O2 : ∙ longen : 02 bindt op Hb
∙ weefsels : O2 w afgestaan
◦ transport van : ∙ suikers, mineralen, vitamines, hormonen, EW, vetten …
∙ afvalstoffen nr nieren, longen …
◦ afweersysteem
◦ water- en zouthuishouding
◦ regulering van lichaamstemperatuur
2. Samenstelling van het bloed
◦ man 5- 6 l en vrouw 4-5 l bloed : 55% plasma (VL) + 45% BC (VAST)
2.1. Bloedcellen
◦ erytrocyten / RBC : ∙ 41% v bloedvolume
∙ transporteren O2 en CO2 dmv Hb
◦ leukocyten / WBC : ∙ 4% v bloedvolume
∙ rol bij afweer tegen infecties + binnendringen lichaamsvreemde stoffen
∙ 3 groepen : granulocyten, monocyten, lymfocyten
: neutrofielen, eosinofielen, basofielen
◦ trombocyten : ∙ 0,1% v bloedvolume
∙ rol bij bloedstolling (hemostase)
2.2. Bloedplasma
◦ samenstelling : ∙ 91% water
∙ EW : albumine, globuline, fibrinogeen, stollingsfactoren …
∙ zouten
∙ voedingsstoffen : suikers, vetten, AZ, vitaminen …
∙ hormonen
∙ afvalstoffen : ureum, urinezuur, koolstofdioxide, bilirubine …
◦ functies : ∙ transport voedingsstoffen + afvalstoffen, hormonen …
∙ regulatie lichaamstemperatuur
∙ water- en zouthuishouding v cellen
2.3. Verdeling van bloedcellen in het bloed
◦ gelijkmatige verdeling BC in bloed agv : ∙ beweging
∙ afstoting door negatief geladen celopp. bij fysiologische pH (7,34)
◦ rouleauxvorming = RBC liggen tegen elkaar aan doordat ze elkaar minder afstoten door pH daling
→ bloedstroom afremmen + bemoeilijkt uitwisseling stoffen tssn cellen en omgeving
3. Bloedafname en soorten bloedstalen
◦ bloedstolling bij bloedafname : serum (bovenaan) + bloedklonter (onderaan)
→ gn stollingsEW aanwezig in serum
◦ bloedstolling vermijden dmv antistollingsmiddel : plasma + WBC en trombocyten + RBC
→ wel stollingsEW aanwezig in plasma
◦ verschillende bloedbuizen : ∙ serum : gn anticoagulans zoals bv EDTA
∙ citraat (anticoagulans)
∙ heparine (anticoagulans)
∙ EDTA : bindt vrije Ca-ionen → afremmen stollingscascade
4
1. Functies van bloed.........................................................................................................................................4
2. Samenstelling van het bloed..........................................................................................................................4
2.1. Bloedcellen.............................................................................................................................................4
2.2. Bloedplasma...........................................................................................................................................4
2.3. Verdeling van bloedcellen in het bloed...................................................................................................4
3. Bloedafname en soorten bloedstalen............................................................................................................4
HOOFDSTUK 2. SOORTEN BLOEDCELLEN...............................................................................................................7
1. WBC – leukocyten..........................................................................................................................................7
1.1. Neutrofielen (40-75%).............................................................................................................................8
1.2. Eosinofielen (1-6%).................................................................................................................................8
1.3. Basofielen (<1%).....................................................................................................................................9
1.4. Monocyten (2-10%)................................................................................................................................9
1.5. Lymfocyten (20-45%)..............................................................................................................................9
1.6. Analyses op WBC..................................................................................................................................10
2. RBC – erythrocyten......................................................................................................................................10
2.1. Morfologie............................................................................................................................................10
2.2. Bloedgroepsystemen.............................................................................................................................11
2.2.1. ABO systeem..................................................................................................................................11
2.2.2. Rhesus systeem..............................................................................................................................12
2.3. Functie van RBC....................................................................................................................................12
2.3.1. Hemoglobine..................................................................................................................................13
2.4. Analyses op RBC....................................................................................................................................13
3. Bloedplaatjes – thrombocyten.....................................................................................................................13
3.1. Morfologie............................................................................................................................................13
3.2. Functie thrombocyten...........................................................................................................................14
3.3. Analyses op thrombocyten...................................................................................................................16
HOOFDSTUK 3. INLEIDING TOT HET IMMUUNSYSTEEM......................................................................................17
1. Niet-specifieke immuunsysteem..................................................................................................................17
2. Specifieke immuunsysteem..........................................................................................................................18
2.1. Start specifieke immuunsysteem..........................................................................................................18
2.2. Humorale immuunsysteem...................................................................................................................18
2.3. Cellulaire immuunsysteem....................................................................................................................18
2.4. Kenmerken specifieke immuunrespons................................................................................................18
3. Immuunrespons met (nt-) specifieke componenten....................................................................................18
HOOFDSTUK 4. ANTIGENEN EN HUN IMMUNOGENICITEIT.................................................................................21
1. Factoren die immunogeniciteit antigeen beïnvloeden.............................................................................21
2. Immuuntolerantie....................................................................................................................................21
1
, 3. Antigeendeterminanten / epitopen.........................................................................................................21
HOOFDSTUK 5. IMMUNOGLOBULINEN - ANTILICHAMEN....................................................................................23
1. Structuur antilichaam..................................................................................................................................23
1.1. Variabele en constante gedeelten.........................................................................................................23
1.2. Hinge region..........................................................................................................................................23
2. Binding antilichaam met antigeen...............................................................................................................23
2.1. Moleculaire basis Ag-Al interactie.........................................................................................................23
2.2. Affiniteit en aviditeit Al-Ag interactie....................................................................................................24
2.3. Kruisreactiviteit.....................................................................................................................................25
3. Verschillende klassen immunoglobulines....................................................................................................25
3.1. Structurele verschillen v verschillende klassen immunoglobulines.......................................................25
3.2. Functionele verschillen.........................................................................................................................26
4. Isotype, allotype, idiotype v antilichaam.....................................................................................................27
5. Monoklonale en polyklonale antilichamen..................................................................................................27
HOOFDSTUK 6. IMMUNOLOGISCHE LABORATORIUMTOEPASSINGEN.................................................................29
1. Agglutinatietechnieken................................................................................................................................29
1.1. Hemagglutinatie....................................................................................................................................29
1.1.1. ABO en Rhesus bloedgroepbepaling..............................................................................................29
1.1.2. Complete en incomplete Al............................................................................................................29
1.1.3. Coombs testen (anti-globuline test)...............................................................................................29
1.2. Latexagglutinatie...................................................................................................................................29
1.3. Bacteriële agglutinatie..........................................................................................................................30
2. Precipitatietechnieken.................................................................................................................................30
2.1. Heidelberger-precipitatiecurve.............................................................................................................30
2.2. Neerslagtechnieken in VL fase...............................................................................................................30
2.3. Neerslagtechnieken in V fase................................................................................................................31
3. Testen obv biologische activiteit..................................................................................................................32
3.1. Complement fixatie test........................................................................................................................32
3.2. Virus neutralisatie test..........................................................................................................................32
3.3. Haemagglutinatie inhibitie test.............................................................................................................32
4. Technieken met gemerkte Al........................................................................................................................32
4.1. Aantonen Ag in vloeibaar media...............................................................................................................32
4.1.1. ELISA : enzyme-linked immunosorbent assay....................................................................................33
4.1.2. Kwantitatieve ELISA............................................................................................................................33
4.1.3.1. Capture ELISA..............................................................................................................................33
4.1.3.2. Competitieve inhibitie assay.......................................................................................................34
4.1.3. EMIT : enzyme multiplied immunoassay technique...........................................................................34
4.1.4. RIA : radio-immunoassay...................................................................................................................36
2
, 4.1.5. Immunofluorescentie.........................................................................................................................37
4.1.6. Chemiluminescente labels.................................................................................................................38
4.2. Aantonen Ag op cellen..............................................................................................................................39
4.2.1. Cellulaire ELISA en FIA....................................................................................................................39
4.2.2. Flow cytometrie.............................................................................................................................40
4.3. Aantonen Ag in weefsels (IMMUNOHISTOCHEMIE)..................................................................................43
4.2.3. Directe methode............................................................................................................................43
4.2.4. Indirecte methode : tweestapsmethode........................................................................................43
4.2.5. Indirecte methode : driestapsmethode..........................................................................................44
4.2.6. Oplosbaar enzyme immunocomplex methode..............................................................................44
4.2.7. (stept)Avidine-biotine methode.....................................................................................................45
4.2.8. Technieken met grote amplificatie v/h signaal...............................................................................46
3
, HOOFDSTUK 1. INLEIDING HEMATOLOGIE
hematologie : ∙ samenstelling + eigenschappen bloed
∙ bloedvormende organen
∙ bloedziekten
1. Functies van bloed
◦ weefsels voorzien van O2 : ∙ longen : 02 bindt op Hb
∙ weefsels : O2 w afgestaan
◦ transport van : ∙ suikers, mineralen, vitamines, hormonen, EW, vetten …
∙ afvalstoffen nr nieren, longen …
◦ afweersysteem
◦ water- en zouthuishouding
◦ regulering van lichaamstemperatuur
2. Samenstelling van het bloed
◦ man 5- 6 l en vrouw 4-5 l bloed : 55% plasma (VL) + 45% BC (VAST)
2.1. Bloedcellen
◦ erytrocyten / RBC : ∙ 41% v bloedvolume
∙ transporteren O2 en CO2 dmv Hb
◦ leukocyten / WBC : ∙ 4% v bloedvolume
∙ rol bij afweer tegen infecties + binnendringen lichaamsvreemde stoffen
∙ 3 groepen : granulocyten, monocyten, lymfocyten
: neutrofielen, eosinofielen, basofielen
◦ trombocyten : ∙ 0,1% v bloedvolume
∙ rol bij bloedstolling (hemostase)
2.2. Bloedplasma
◦ samenstelling : ∙ 91% water
∙ EW : albumine, globuline, fibrinogeen, stollingsfactoren …
∙ zouten
∙ voedingsstoffen : suikers, vetten, AZ, vitaminen …
∙ hormonen
∙ afvalstoffen : ureum, urinezuur, koolstofdioxide, bilirubine …
◦ functies : ∙ transport voedingsstoffen + afvalstoffen, hormonen …
∙ regulatie lichaamstemperatuur
∙ water- en zouthuishouding v cellen
2.3. Verdeling van bloedcellen in het bloed
◦ gelijkmatige verdeling BC in bloed agv : ∙ beweging
∙ afstoting door negatief geladen celopp. bij fysiologische pH (7,34)
◦ rouleauxvorming = RBC liggen tegen elkaar aan doordat ze elkaar minder afstoten door pH daling
→ bloedstroom afremmen + bemoeilijkt uitwisseling stoffen tssn cellen en omgeving
3. Bloedafname en soorten bloedstalen
◦ bloedstolling bij bloedafname : serum (bovenaan) + bloedklonter (onderaan)
→ gn stollingsEW aanwezig in serum
◦ bloedstolling vermijden dmv antistollingsmiddel : plasma + WBC en trombocyten + RBC
→ wel stollingsEW aanwezig in plasma
◦ verschillende bloedbuizen : ∙ serum : gn anticoagulans zoals bv EDTA
∙ citraat (anticoagulans)
∙ heparine (anticoagulans)
∙ EDTA : bindt vrije Ca-ionen → afremmen stollingscascade
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