Inhoud
Hoofdstuk 6: additionele LM ................................................................................................................... 2
Multiplex immunokleuringen .............................................................................................................. 2
Confocale microscopen ....................................................................................................................... 2
CLSM: confocale laser scanning (of point scanning) microscoop ................................................... 2
SDCM: Spinning disk confocale microscoop.................................................................................... 3
2-foton excitatie microscopie.............................................................................................................. 3
TIRF: Total internal reflection fluorescence microscopie .................................................................... 4
FRAP: Fluorescence recovery after photobleaching ........................................................................... 4
FRET: Förster resonance energy transfer ............................................................................................ 4
Super-resolutie microscopie: .............................................................................................................. 5
SIM: Structured illumination microscopy ........................................................................................ 5
STED: Stimulated emission depletion microscopy .......................................................................... 5
PALM: Photoactivated localization microscopy .............................................................................. 6
Lichtveld-microscopie.......................................................................................................................... 6
Volume elektronenmicroscopie .......................................................................................................... 7
Array tomografie ............................................................................................................................. 7
SBF-SEM: serial block face scanning elektronenmicroscopie ......................................................... 7
FIB-SEM: focused ion beam scanning elektronenmicroscopie ....................................................... 7
TFM: traction force microscopie ......................................................................................................... 8
1
, Hoofdstuk 6: additionele LM
• Mounten
o = kleuring afdekken met dekglaasje
o redenen om te mounten
▪ Op plaats houden van te bekijken materiaal
▪ Uitdrogen voorkomen
▪ Gebruik van juiste refractieve index
▪ Voorkomen van fading
▪ Langer bewaren
Multiplex immunokleuringen
Eerst werd uiteraard weefsel gefixeerd, verschillende secties werden gemaakt. Nadien worden
volgende stappen gevolgd:
1) eerst haematoxyline kleuring -> kernen worden zichtbaar
2) mounting
3) afbeelding maken
4) dekglaasje verwijderen
5) voorbehandeling om naar kleuring te gaan
6) eerste kleuring, met AEC precipitaat -> rode kleur te zien
7) afbeelding maken
8) kleur wegwassen met ethanol
9) antilichaam wegwassen
10) nieuwe kleuring
➔ verschillende kleurcycli na elkaar
➔ afbeeldingen op elkaar leggen
Confocale microscopen
Confocale microscopie gebruikt optische methoden om fluorescentiebeelden te verkrijgen van een
specifieke focaal vlak en om licht uit andere focale vlakken uit te sluiten.
CLSM: confocale laser scanning (of point scanning) microscoop
2
Hoofdstuk 6: additionele LM ................................................................................................................... 2
Multiplex immunokleuringen .............................................................................................................. 2
Confocale microscopen ....................................................................................................................... 2
CLSM: confocale laser scanning (of point scanning) microscoop ................................................... 2
SDCM: Spinning disk confocale microscoop.................................................................................... 3
2-foton excitatie microscopie.............................................................................................................. 3
TIRF: Total internal reflection fluorescence microscopie .................................................................... 4
FRAP: Fluorescence recovery after photobleaching ........................................................................... 4
FRET: Förster resonance energy transfer ............................................................................................ 4
Super-resolutie microscopie: .............................................................................................................. 5
SIM: Structured illumination microscopy ........................................................................................ 5
STED: Stimulated emission depletion microscopy .......................................................................... 5
PALM: Photoactivated localization microscopy .............................................................................. 6
Lichtveld-microscopie.......................................................................................................................... 6
Volume elektronenmicroscopie .......................................................................................................... 7
Array tomografie ............................................................................................................................. 7
SBF-SEM: serial block face scanning elektronenmicroscopie ......................................................... 7
FIB-SEM: focused ion beam scanning elektronenmicroscopie ....................................................... 7
TFM: traction force microscopie ......................................................................................................... 8
1
, Hoofdstuk 6: additionele LM
• Mounten
o = kleuring afdekken met dekglaasje
o redenen om te mounten
▪ Op plaats houden van te bekijken materiaal
▪ Uitdrogen voorkomen
▪ Gebruik van juiste refractieve index
▪ Voorkomen van fading
▪ Langer bewaren
Multiplex immunokleuringen
Eerst werd uiteraard weefsel gefixeerd, verschillende secties werden gemaakt. Nadien worden
volgende stappen gevolgd:
1) eerst haematoxyline kleuring -> kernen worden zichtbaar
2) mounting
3) afbeelding maken
4) dekglaasje verwijderen
5) voorbehandeling om naar kleuring te gaan
6) eerste kleuring, met AEC precipitaat -> rode kleur te zien
7) afbeelding maken
8) kleur wegwassen met ethanol
9) antilichaam wegwassen
10) nieuwe kleuring
➔ verschillende kleurcycli na elkaar
➔ afbeeldingen op elkaar leggen
Confocale microscopen
Confocale microscopie gebruikt optische methoden om fluorescentiebeelden te verkrijgen van een
specifieke focaal vlak en om licht uit andere focale vlakken uit te sluiten.
CLSM: confocale laser scanning (of point scanning) microscoop
2
