IDENTIFICATIE VAN EEN ONBEKENDE BACTERIE: biochemische kenmerken
INDICATOR
TEST / VB TESTRESULTAAT VERKLARING (omzetting, reactie, pH+, enzym)
REAGENTIA
AANTONEN VAN ENZYMES (zuurstofbehoefte)
Oxidase test OXIDASE + Reactie:
Paarsblauwe kleur N,N,N’,N’-tetramethyl-p-fenyleendiamine (TPD) Würster’s blauw
Obligaat aeroob Cyt C (ox) Cyt C (red)
TPD Enzym: cytochroom-oxidase
OXIDASE – Verklaring: Oxidase strips bevatten TPD. TPD fungeert als
Kleurloos kunstmatige e—donor en wordt geoxideerd. Cyt C wordt hierbij
Niet obligaat aeroob gereduceerd. Zo kan de zuurstofbehoefte aangetoond worden.
Katalase test KATALASE + Obligaat aeroob Reactie: 2H2O2 2H2O + O2
Gasbellen met schuimvorming Enzym: katalase = haemoproteïne met Fe(III) (trivalent ijzer) als
KATALASE +/- Facultatief anaeroob reactief bestanddeel
Veel gasbellen, weinig schuim Verklaring: Een druppel H2O2-oplossing wordt op een kiem op een
/
KATALASE -/+ Facultatief aeroob voorwerpglaasje gebracht. Als het enzym aanwezig is wordt H2O2
Hier en daar gasbellen omgezet in water en zuurstof. Deze test geeft info over de
KATALASE – Obligaat anaeroob zuurstofbehoefte.
Druppel onveranderd
AFBRAAK VAN KOOLHYDRATEN
Kligler Iron Agar Reactie: Na2S2O3 en Fe(III)zout H2S (reductie)
Tong rood – stomp geel + GLU+
KIA & Nagaan afbraak suikers.
Verklaring: Met deze test wordt enerzijds zuur- en gasvorming uit de
Tong geel + stomp geel + LAC+ (GLU+) suikers glucose en lactose nagegaan.
Fenolrood
De gele kleur wijst op zuurvorming. In de VB zit een kleine
Geel–rood
Tong rood – stomp rood + geen hoeveelheid GLU. Als enkel glucose vergist wordt, dan wordt het
pepton in de VB ook aeroob afgebroken. Dit zorgt voor een basische
Scheuren gasvorming reactie die dan de zure reactie maskeert. Hierbij zal de tong (terug)
rood kleuren.
Zwarte stomp H2S+ GLU+
Ook kan waterstofsulfide detectie nagegaan worden. De zwarte
stomp wijst op sulfaatreductie of sulfide vorming.
1
, Triple Sugar Iron Agar Reactie: Na2S2O3 en Fe(III)zout → H2S (reductie)
TSI Tong rood – stomp geel + GLU+ & Nagaan afbraak suikers.
Verklaring: Met deze test wordt enerzijds zuur- en gasvorming uit de
Tong geel + stomp geel + LAC+ en/of SUC +
suikers glucose, lactose en sucrose nagegaan.
(GLU+)
De gele kleur wijst op zuurvorming. In de VB zit een kleine
Fenolrood hoeveelheid GLU. Als enkel glucose vergist wordt, dan wordt het
Tong rood – stomp rood - geen
Geel-rood pepton in de VB ook aeroob afgebroken. Dit zorgt voor een basische
reactie die dan de zure reactie maskeert. Hierbij zal de tong (terug)
Scheuren gasvorming rood kleuren.
Ook kan waterstofsulfide detectie nagegaan worden. De zwarte
Zwarte stomp H2S+ GLU+ stomp wijst op sulfaatreductie of sulfide vorming.
LAC+ en/of SUC+ kan nagegaan worden via CLED medium.
Hugh & Leifson-test O F Reactie: De heldere groenblauwe VB heeft een neutrale pH. Bij
O/F test Geel Geel +/+ Fermentatieve zuurvorming verkleurt het buisje naargelang de pH.
Broom- Verklaring: Hierbij wordt nagegaan of het gaat om een aerobe
kiem
thymol- (oxidatieve) of anaerobe (fermentatieve) afbraak. Bij het F-buisje
blauw Geel Groen- +/- Oxidatieve kiem
blauw wordt een laagje paraffine toegevoegd om een anaeroob milieu te
Geel–blauw creëren.
Blauw Groen- -/- Geen zuurvorming:
blauw inerte kiem
ONPG-test β-GALACTOSIDASE + Reactie: ONPG – (β-galactosidase) o-nitrofenol + galactose
Gele kleur (! Kan in ander test LAC- zijn Enzym: afbraak van lactose: (1) permease en (2) β-galactosidase
ONPG disc door afwezigheid permease!) Verklaring: ONPG is structureel gelijkaardig als lactose. Met deze test
β-GALACTOSIDASE – kan de lactose omzetting (gedeeltelijk) gecontroleerd worden.
Kleurloos
Methylrood- Voges Rood + Reactie:
Proskauer Methylrood MR - Bij de het MR buisje wordt methylrood toegevoegd als indicator.
MRVP-test Rood–geel Geel - Deze verkleurd rood bij een pH vanaf 4,4.
- Bij de VP test wordt alfa-naftol en KOH toegevoegd en geschud.
Koperrode kleur + Acetylmethylcarbinol-3-hydroxybutanon diacetyl
Alfa-naftol VP + alfa naftol (+KOH) butaandion + 2H2O
en KOH - Geen koperrode kleur Verklaring: Hierbij wordt aangetoond hoe ver de zuurstofvorming uit
glucose gaat. De ene test sluit de ander uit.
2
INDICATOR
TEST / VB TESTRESULTAAT VERKLARING (omzetting, reactie, pH+, enzym)
REAGENTIA
AANTONEN VAN ENZYMES (zuurstofbehoefte)
Oxidase test OXIDASE + Reactie:
Paarsblauwe kleur N,N,N’,N’-tetramethyl-p-fenyleendiamine (TPD) Würster’s blauw
Obligaat aeroob Cyt C (ox) Cyt C (red)
TPD Enzym: cytochroom-oxidase
OXIDASE – Verklaring: Oxidase strips bevatten TPD. TPD fungeert als
Kleurloos kunstmatige e—donor en wordt geoxideerd. Cyt C wordt hierbij
Niet obligaat aeroob gereduceerd. Zo kan de zuurstofbehoefte aangetoond worden.
Katalase test KATALASE + Obligaat aeroob Reactie: 2H2O2 2H2O + O2
Gasbellen met schuimvorming Enzym: katalase = haemoproteïne met Fe(III) (trivalent ijzer) als
KATALASE +/- Facultatief anaeroob reactief bestanddeel
Veel gasbellen, weinig schuim Verklaring: Een druppel H2O2-oplossing wordt op een kiem op een
/
KATALASE -/+ Facultatief aeroob voorwerpglaasje gebracht. Als het enzym aanwezig is wordt H2O2
Hier en daar gasbellen omgezet in water en zuurstof. Deze test geeft info over de
KATALASE – Obligaat anaeroob zuurstofbehoefte.
Druppel onveranderd
AFBRAAK VAN KOOLHYDRATEN
Kligler Iron Agar Reactie: Na2S2O3 en Fe(III)zout H2S (reductie)
Tong rood – stomp geel + GLU+
KIA & Nagaan afbraak suikers.
Verklaring: Met deze test wordt enerzijds zuur- en gasvorming uit de
Tong geel + stomp geel + LAC+ (GLU+) suikers glucose en lactose nagegaan.
Fenolrood
De gele kleur wijst op zuurvorming. In de VB zit een kleine
Geel–rood
Tong rood – stomp rood + geen hoeveelheid GLU. Als enkel glucose vergist wordt, dan wordt het
pepton in de VB ook aeroob afgebroken. Dit zorgt voor een basische
Scheuren gasvorming reactie die dan de zure reactie maskeert. Hierbij zal de tong (terug)
rood kleuren.
Zwarte stomp H2S+ GLU+
Ook kan waterstofsulfide detectie nagegaan worden. De zwarte
stomp wijst op sulfaatreductie of sulfide vorming.
1
, Triple Sugar Iron Agar Reactie: Na2S2O3 en Fe(III)zout → H2S (reductie)
TSI Tong rood – stomp geel + GLU+ & Nagaan afbraak suikers.
Verklaring: Met deze test wordt enerzijds zuur- en gasvorming uit de
Tong geel + stomp geel + LAC+ en/of SUC +
suikers glucose, lactose en sucrose nagegaan.
(GLU+)
De gele kleur wijst op zuurvorming. In de VB zit een kleine
Fenolrood hoeveelheid GLU. Als enkel glucose vergist wordt, dan wordt het
Tong rood – stomp rood - geen
Geel-rood pepton in de VB ook aeroob afgebroken. Dit zorgt voor een basische
reactie die dan de zure reactie maskeert. Hierbij zal de tong (terug)
Scheuren gasvorming rood kleuren.
Ook kan waterstofsulfide detectie nagegaan worden. De zwarte
Zwarte stomp H2S+ GLU+ stomp wijst op sulfaatreductie of sulfide vorming.
LAC+ en/of SUC+ kan nagegaan worden via CLED medium.
Hugh & Leifson-test O F Reactie: De heldere groenblauwe VB heeft een neutrale pH. Bij
O/F test Geel Geel +/+ Fermentatieve zuurvorming verkleurt het buisje naargelang de pH.
Broom- Verklaring: Hierbij wordt nagegaan of het gaat om een aerobe
kiem
thymol- (oxidatieve) of anaerobe (fermentatieve) afbraak. Bij het F-buisje
blauw Geel Groen- +/- Oxidatieve kiem
blauw wordt een laagje paraffine toegevoegd om een anaeroob milieu te
Geel–blauw creëren.
Blauw Groen- -/- Geen zuurvorming:
blauw inerte kiem
ONPG-test β-GALACTOSIDASE + Reactie: ONPG – (β-galactosidase) o-nitrofenol + galactose
Gele kleur (! Kan in ander test LAC- zijn Enzym: afbraak van lactose: (1) permease en (2) β-galactosidase
ONPG disc door afwezigheid permease!) Verklaring: ONPG is structureel gelijkaardig als lactose. Met deze test
β-GALACTOSIDASE – kan de lactose omzetting (gedeeltelijk) gecontroleerd worden.
Kleurloos
Methylrood- Voges Rood + Reactie:
Proskauer Methylrood MR - Bij de het MR buisje wordt methylrood toegevoegd als indicator.
MRVP-test Rood–geel Geel - Deze verkleurd rood bij een pH vanaf 4,4.
- Bij de VP test wordt alfa-naftol en KOH toegevoegd en geschud.
Koperrode kleur + Acetylmethylcarbinol-3-hydroxybutanon diacetyl
Alfa-naftol VP + alfa naftol (+KOH) butaandion + 2H2O
en KOH - Geen koperrode kleur Verklaring: Hierbij wordt aangetoond hoe ver de zuurstofvorming uit
glucose gaat. De ene test sluit de ander uit.
2
