Les 2
DNA-isolatie – Doelen
In het forensische onderzoek hebben we niet te maken met ideale stalen (voorbeeld van een ideaal
staal is een bloedname bij een patiënt, hier zit sowieso DNA in), we vinden namelijk allerhande
sporen terug en het DNA kan niet altijd optimaal zijn door de invloed van bijvoorbeeld niet humaan
DNA, bacteriën, schimmels, etc.. Daarom scheiden we het DNA van al de rest zodat niets kan
interfereren met de downstream processen. In het forensische onderzoek zijn er dus verschillende
doelen voor het isoleren van het DNA:
DNA scheiden van andere cellulaire moleculen en niet-cellulaire componenten, denk aan
eiwitten en vetzuren, enzymen zoals DNAsen, chemische stoffen in kleding en metaalionen
en silicium (zand). De chemische stoffen in kleding en metaalionen en silicium zijn eigen aan
de forensische biologische sporen
Verwijderen van potentiële inhibitoren. Denk aan hemoglobine in het bloed, melanine in de
haren en chemische stoffen in kleding (in jeans kleiding kunnen er chemische stoffen zitten
die kunnen interfereren met de latere PCR reactie)
Preventie van verdere degradatie van het DNA
Concentratie van het DNA in een klein volume
Het is natuurlijk belangrijk dat wij zo veel mogelijk DNA uit de sporen kunnen halen. Maar, sommige
sporen bevatten niet veel DNA. We moeten dus de rest weghalen, zodanig dat de concentratie DNA
hoog genoeg is zodat we verder kunnen werken.
DNA-isolatie – Klassieke methoden
Bij de organische extractie wordt het spoor gemengd met een oplossing van water en fenol,
chloroform en isoethyl alcohol. Hierdoor zullen DNA en eiwitten gescheiden worden. Het voordeel
van organische extractie is dat het een bewezen methodologie is. Echter is dit een tijdrovende
procedure, waarbij er veel transfers plaatsvinden. Daarnaast worden er toxische organische stoffen
gebruikt (denk aan chloroform) en is er kans op introductie van contaminatie en kans op verlies van
DNA. Deze procedure kan niet geautomatiseerd worden. Chelex is de stof die men toevoegt aan de
oplossing en deze stof zorgt ervoor dat bepaalde ionen gecapteerd worden die mogelijk een
bewerking hebben op de PCR reactie. Dus, het spoor wordt opgewarmd waardoor de cellen lyseren
chelex wordt toegevoegd en die zal de ionen kapteren. De voordelen van het gebruik van chelex
zijn dat het snel en goedkoop is. we zien hier minder kans op de introductie van contaminatie. Maar,
Pagina 1 van 11
DNA-isolatie – Doelen
In het forensische onderzoek hebben we niet te maken met ideale stalen (voorbeeld van een ideaal
staal is een bloedname bij een patiënt, hier zit sowieso DNA in), we vinden namelijk allerhande
sporen terug en het DNA kan niet altijd optimaal zijn door de invloed van bijvoorbeeld niet humaan
DNA, bacteriën, schimmels, etc.. Daarom scheiden we het DNA van al de rest zodat niets kan
interfereren met de downstream processen. In het forensische onderzoek zijn er dus verschillende
doelen voor het isoleren van het DNA:
DNA scheiden van andere cellulaire moleculen en niet-cellulaire componenten, denk aan
eiwitten en vetzuren, enzymen zoals DNAsen, chemische stoffen in kleding en metaalionen
en silicium (zand). De chemische stoffen in kleding en metaalionen en silicium zijn eigen aan
de forensische biologische sporen
Verwijderen van potentiële inhibitoren. Denk aan hemoglobine in het bloed, melanine in de
haren en chemische stoffen in kleding (in jeans kleiding kunnen er chemische stoffen zitten
die kunnen interfereren met de latere PCR reactie)
Preventie van verdere degradatie van het DNA
Concentratie van het DNA in een klein volume
Het is natuurlijk belangrijk dat wij zo veel mogelijk DNA uit de sporen kunnen halen. Maar, sommige
sporen bevatten niet veel DNA. We moeten dus de rest weghalen, zodanig dat de concentratie DNA
hoog genoeg is zodat we verder kunnen werken.
DNA-isolatie – Klassieke methoden
Bij de organische extractie wordt het spoor gemengd met een oplossing van water en fenol,
chloroform en isoethyl alcohol. Hierdoor zullen DNA en eiwitten gescheiden worden. Het voordeel
van organische extractie is dat het een bewezen methodologie is. Echter is dit een tijdrovende
procedure, waarbij er veel transfers plaatsvinden. Daarnaast worden er toxische organische stoffen
gebruikt (denk aan chloroform) en is er kans op introductie van contaminatie en kans op verlies van
DNA. Deze procedure kan niet geautomatiseerd worden. Chelex is de stof die men toevoegt aan de
oplossing en deze stof zorgt ervoor dat bepaalde ionen gecapteerd worden die mogelijk een
bewerking hebben op de PCR reactie. Dus, het spoor wordt opgewarmd waardoor de cellen lyseren
chelex wordt toegevoegd en die zal de ionen kapteren. De voordelen van het gebruik van chelex
zijn dat het snel en goedkoop is. we zien hier minder kans op de introductie van contaminatie. Maar,
Pagina 1 van 11
