celcultuur en immunochemie
H1: inleiding
begin: kikker weefsel dat men ging isoleren en proberen levend te houden
↪ waarom kikker: we kunnen het op kamertemperatuur levend houden, geen
incubator
MAAR problemen als we naar aparte cellen willen gaan
enkele vereisten:
↪ 3 belangrijke ontdekkingen
1) ontdekking antibiotica
2) trypsine -> om cellen los te maken van cultuurflessen
3) ontwikkeling van chemisch gedefinieerde cultuurmedia
- hoe steriel houden? → antibioticum
eerste antibioticum = penicilline
- hoe kunnen we de cellen wel apart krijgen → trypsine toevoegen (een
enzym/protease) → maakt cellen los
- ook cultuurmedia nodig voor aanvoer voedingsstoffen: water + extra stoffen (glucose,
vitamines, …)
polio virus:
= kinderverlamming
= naakt virus = RNA virus
↪ groot probleem in de jaren 40-50
↪ grote doorbraak in de jaren 50 -> eerste keer het poliovirus gekweekt in
celcultuur
virussen = 30-300 nm
↪ eiwitmantel waar genetisch materiaal in zit (RNA virus)
bezit spikes -> glycoproteïne antenne die nodig is om te binden met de receptor v/d cel
↪ hoe maken we het vaccin?
- optie 1: alle virussen worden gecollecteerd en inactief gemaakt
=> dmv formaldehyde -> zorgt voor behoud van structuur maar dood organisme
(hierdoor kan het immuunsysteem goed functioneren)
=> combinatie van een aminozuur en formaldehyde -> enzymen kunnen niet
functioneren → geïnactiveerd vaccin
1
, - optie 2: levend verzwakt vaccin
↪ vermenigvuldiging om het zwakker te maken
↪ zorgen dat enkel het virus kan groeien in celcultuur en niet in lichaam
we hebben veel virus nodig om een vaccin te kunnen ontwikkelen
virus: obligaat intracellulair -> heeft een cel nodig om aan te tasten
HELA cells -> kankeronderzoek
= cellen van de baarmoederhals
nadeel = hela cellen zijn wijd verspreid en besmetten soms ook andere cellen
hybridoma-technologie:
hoe kunnen we antilichamen produceren?
=> B-cellen maken antilichamen aan
B-cellen zullen afsterven als we ze proberen te retrieven, hiervoor hebben we een oplossing
nodig
↪ in de muis spuiten we een antigen en dan gaan we de B-cellen kunnen isoleren
gevolg: B-cellen die een antilichaam aanvallen
probleem: heeft een eindige levensduur
→ smelten samen tot een tumorcel = blijvend groeiend
sommige B-cellen zullen ook “foute” antilichamen aanmaken die niet zullen passen
hybridomas: B-cellen die geen eindige levensduur hebben
↪ polyethyleenglycol toevoegen aan B-cellen om een tumorcel beter te fusioneren
volgende stap
→ antigeen coaten waardoor we enkel de goede hybridomas overhouden (alle plasmacellen
bij elkaar gooien in een antigen)
2
, samengevat
1) Antigeen wordt ingespoten → muis begint antilichamen te produceren
2) Milt wordt weggenomen B-cellen (= cellen die antilichamen aanmaken)
worden geïsoleerd
3) Aanmaak hybride cel = hybridoma door tumorcel en B-cel te laten fuseren
Hybridoma = B-cellen die eeuwig (nodige) antilichamen kunnen produceren
Polyethyleenglycol wordt toegevoegd aan B-cellen en tumorcel om beter te fusioneren
4) Antigen coaten alle plasmacellen samen gooien bij antigen en enkel goede hybridomas
selecteren (=Hybridomas gescreend en gewenste antilichaam geselecteerd, de anderen
worden weggewassen)
5) Antilichaam-producerende hybridoma worden gekloond
6) Gekloonde cellen worden verwijderd, enkel nodige antilichamen blijven over
cel en weefseltechnologie:
DOEL: Het verkrijgen van (bio)implantaten om uitgevallen of slecht werkende organen en
weefsels te ondersteunen of te vervangen
Vooral amputaties bij diabetes
=> slechte doorbloeding zorgt voor slechte genezing van wonden
Diabetes type I: eilandjes van langerhans functioneren niet of slecht
- oplossing: scaffold: blauwe gel: plaatsen die ervoor gaat zorgen dat ze wel op actief
worden gezet
hoe gaan we aparte delen in celcultuur brengen? ->
1) weefsel kapot maken
2) nu verkrijgen we allemaal aparte cellen die in een cultuurfles worden gebracht
3) stukje plastic; substraat waar cellen op zullen vasthechten
4) uitspreiden en groeien tot een monoloog, na ong een week -> afsterven
=> oplossing trypsine = zorgt ervoor dat cellen niet afsterven
5) subcultivatie of passage = cellen in een nieuwe cultuurfles brengen
voordelen
- controle van de omgeving
fysico chemische parameters:
● pH (7.2), temp (37°C), osmotische druk (isotoon -> 0,9% NaCl), O2 (21%) en
CO2 (0,03%)
fysiologische parameters:
● voedingsstoffen ( +% serum)
-> meeste cellen hebben echter een supplement nodig in hun media om te kunnen
delen
3
H1: inleiding
begin: kikker weefsel dat men ging isoleren en proberen levend te houden
↪ waarom kikker: we kunnen het op kamertemperatuur levend houden, geen
incubator
MAAR problemen als we naar aparte cellen willen gaan
enkele vereisten:
↪ 3 belangrijke ontdekkingen
1) ontdekking antibiotica
2) trypsine -> om cellen los te maken van cultuurflessen
3) ontwikkeling van chemisch gedefinieerde cultuurmedia
- hoe steriel houden? → antibioticum
eerste antibioticum = penicilline
- hoe kunnen we de cellen wel apart krijgen → trypsine toevoegen (een
enzym/protease) → maakt cellen los
- ook cultuurmedia nodig voor aanvoer voedingsstoffen: water + extra stoffen (glucose,
vitamines, …)
polio virus:
= kinderverlamming
= naakt virus = RNA virus
↪ groot probleem in de jaren 40-50
↪ grote doorbraak in de jaren 50 -> eerste keer het poliovirus gekweekt in
celcultuur
virussen = 30-300 nm
↪ eiwitmantel waar genetisch materiaal in zit (RNA virus)
bezit spikes -> glycoproteïne antenne die nodig is om te binden met de receptor v/d cel
↪ hoe maken we het vaccin?
- optie 1: alle virussen worden gecollecteerd en inactief gemaakt
=> dmv formaldehyde -> zorgt voor behoud van structuur maar dood organisme
(hierdoor kan het immuunsysteem goed functioneren)
=> combinatie van een aminozuur en formaldehyde -> enzymen kunnen niet
functioneren → geïnactiveerd vaccin
1
, - optie 2: levend verzwakt vaccin
↪ vermenigvuldiging om het zwakker te maken
↪ zorgen dat enkel het virus kan groeien in celcultuur en niet in lichaam
we hebben veel virus nodig om een vaccin te kunnen ontwikkelen
virus: obligaat intracellulair -> heeft een cel nodig om aan te tasten
HELA cells -> kankeronderzoek
= cellen van de baarmoederhals
nadeel = hela cellen zijn wijd verspreid en besmetten soms ook andere cellen
hybridoma-technologie:
hoe kunnen we antilichamen produceren?
=> B-cellen maken antilichamen aan
B-cellen zullen afsterven als we ze proberen te retrieven, hiervoor hebben we een oplossing
nodig
↪ in de muis spuiten we een antigen en dan gaan we de B-cellen kunnen isoleren
gevolg: B-cellen die een antilichaam aanvallen
probleem: heeft een eindige levensduur
→ smelten samen tot een tumorcel = blijvend groeiend
sommige B-cellen zullen ook “foute” antilichamen aanmaken die niet zullen passen
hybridomas: B-cellen die geen eindige levensduur hebben
↪ polyethyleenglycol toevoegen aan B-cellen om een tumorcel beter te fusioneren
volgende stap
→ antigeen coaten waardoor we enkel de goede hybridomas overhouden (alle plasmacellen
bij elkaar gooien in een antigen)
2
, samengevat
1) Antigeen wordt ingespoten → muis begint antilichamen te produceren
2) Milt wordt weggenomen B-cellen (= cellen die antilichamen aanmaken)
worden geïsoleerd
3) Aanmaak hybride cel = hybridoma door tumorcel en B-cel te laten fuseren
Hybridoma = B-cellen die eeuwig (nodige) antilichamen kunnen produceren
Polyethyleenglycol wordt toegevoegd aan B-cellen en tumorcel om beter te fusioneren
4) Antigen coaten alle plasmacellen samen gooien bij antigen en enkel goede hybridomas
selecteren (=Hybridomas gescreend en gewenste antilichaam geselecteerd, de anderen
worden weggewassen)
5) Antilichaam-producerende hybridoma worden gekloond
6) Gekloonde cellen worden verwijderd, enkel nodige antilichamen blijven over
cel en weefseltechnologie:
DOEL: Het verkrijgen van (bio)implantaten om uitgevallen of slecht werkende organen en
weefsels te ondersteunen of te vervangen
Vooral amputaties bij diabetes
=> slechte doorbloeding zorgt voor slechte genezing van wonden
Diabetes type I: eilandjes van langerhans functioneren niet of slecht
- oplossing: scaffold: blauwe gel: plaatsen die ervoor gaat zorgen dat ze wel op actief
worden gezet
hoe gaan we aparte delen in celcultuur brengen? ->
1) weefsel kapot maken
2) nu verkrijgen we allemaal aparte cellen die in een cultuurfles worden gebracht
3) stukje plastic; substraat waar cellen op zullen vasthechten
4) uitspreiden en groeien tot een monoloog, na ong een week -> afsterven
=> oplossing trypsine = zorgt ervoor dat cellen niet afsterven
5) subcultivatie of passage = cellen in een nieuwe cultuurfles brengen
voordelen
- controle van de omgeving
fysico chemische parameters:
● pH (7.2), temp (37°C), osmotische druk (isotoon -> 0,9% NaCl), O2 (21%) en
CO2 (0,03%)
fysiologische parameters:
● voedingsstoffen ( +% serum)
-> meeste cellen hebben echter een supplement nodig in hun media om te kunnen
delen
3
