ELISA
= enzyme-linked immuno sorbent assay of enzyme immuno assay (EIA)
- Is een immunochemische reactie gebaseerd op de specifieke binding tussen Ag en Ab
Antilichamen
- Proteïnen die worden gesecreteerd door B-lymfocyten (in vertebraten)
- Gebruikt voor diagnose van ziekten (infectieuze ziekten, auto-immuun ziekten, oncologie,
stofwisselingsziektes, …)
- Ook gebruikt voor fysiologische condities te onderzoeken of om in te schatten of een
bepaalde therapie aanslaat
- Biologische functie:
o Neutralisatie van virussen of toxines
o Het opsonisatie mechanisme
o Het complementsysteem
o Anti-lichaam celgemedieerde cytotoxiciteit
- Monoklonaal antilichaam: binding met slechts één epitoop
- Polyklonaal antilichaam: binding met meerdere epitopen met verschillende structuren
Blootstelling aan bepaalde ziektekiem proliferatie van sepcifieke B-cel met herkenning voor dit
antigen (= primaire respons) aanmaak van geheugen B-cellen secundaire respons veel
hardere immuun respons
IgA
IgD
IgE
IgG Belangrijkste humorale component tegen
binnendringende pathogenen. Kan de placenta
passeren om de foetus immunitet te geven
IgM Expressie op oppervlka van B-cellen in een
pentamere vorm meer zeer hoge aviditeit.
Elimineert pathogenen in de vroege stadia van
door B-cellen gemedieerde umuniteit voordat
er voldoende IgG is
Structuur antilichamen
- 2 zware en 2 lichte ketens
- Y vorm met 2 variabele regio’s (FAB) en 1 constant (FC) gedeelte
o Op variabele regio’s kunnen antigenen binden
- Glycosilatie bepaalt de structuur van het FC en bepaalt de FC receptoren die kunnen binden
ter recrutering van effector cellen
- Amino terminus en carboxyl terminus
- Karakteristieken
o Bivalent, heterodimeer
o Disulfide binding
o Linker regio laat beweging toe
, Karakteristieken
- Gevoeligheid
o Detectielimiet (concentratie in pg/ml) betere detectielimiet = lagere limiet
o Afhankelijk van Ka
o Bepaalt de hoeveelheid antigen dat aanwezig moet zijn om een signaal te geven
- Specifiteit
o De mogelijkheid om een specifiek antigen te meten zonder interferentie
o Cave: kruisreactie, contaminanten
- Precisie
o Hoe groot is afwijking/variatie op metingen kleinere standaard afwijking = beter
o Variabiliteit van het testen
Herhaalbaarheid: zelfde persoon, zelfde pipet zelfde resultaten
Reproduceerbaarheid: versch. persoenen en omgeving zelfde resultaten
- Nauwkeurigheid
o Hoe dicht meetresultaten liggen bij de echte waarde
o Afhankelijk van precisie
Specifiteit van het antilichaam
- Niet bepaald door volledige antilichamen: bepaald door Complementaire Determining Regio
o Hypervariabele regio’s
- Epitoop: klein, toegankelijk deel van een macromolecuul dat herkend kan worden door Ab, B-
cellen en T-cellen
- Paratoop : antigeenbindende plaats: onderdeel van Ab dat antigen herkent en eraan bindt
- Idiotype: gedeeld kenmerk tussen groep immunoglobuline‐ of T‐celreceptormoleculen
(TCR) op basis van antigeenbindingsspecifiteit
- Idiotoop :
Wat bepaald de binding tussen epi- en paratoop?
Verzameling ‘zwakke’ niet-covalente bindingen bepalen affiniteit tussen epi- en paratoop
- Waterstof bruggen: Chemische binding waarbij een
waterstof atoom (positief geladen) van een bepaald
molecule wordt aangetrokken door de electronegativiteit ve ander molecule
- Van der Waals krachten: krachten tussen niet‐ gebonden atomen of moleculen
- Hydrofobe binding: De aantrekkingskracht tussen moleculen door de positionering van niet‐
hydrofiele delen van twee twee moleculen
- Electrostatische (Ionische) binding: Valentie binding
tussen twee atomen, aangetrokken door electrostatische krachten, transfer van één of
meerdere elektronen tussen twee atomen
Factoren die de antilichaam-antigen binding beïnvloeden:
1. Temperatuur
De optimale temperatuur voor AgAb reactie zal afhangen van de chemische aard van de epitoop, par
atoop en het type
bindingen dat betrokken is bij hun interactie. De vorming van waterstofbruggen is bijvoorbeeld vaak
exotherm. Deze
bindingen zijn stabieler bij lagere temperatuur en kunnen belangrijker zijn bij het omgaan met koolhy
draatAgs.
2. pH
= enzyme-linked immuno sorbent assay of enzyme immuno assay (EIA)
- Is een immunochemische reactie gebaseerd op de specifieke binding tussen Ag en Ab
Antilichamen
- Proteïnen die worden gesecreteerd door B-lymfocyten (in vertebraten)
- Gebruikt voor diagnose van ziekten (infectieuze ziekten, auto-immuun ziekten, oncologie,
stofwisselingsziektes, …)
- Ook gebruikt voor fysiologische condities te onderzoeken of om in te schatten of een
bepaalde therapie aanslaat
- Biologische functie:
o Neutralisatie van virussen of toxines
o Het opsonisatie mechanisme
o Het complementsysteem
o Anti-lichaam celgemedieerde cytotoxiciteit
- Monoklonaal antilichaam: binding met slechts één epitoop
- Polyklonaal antilichaam: binding met meerdere epitopen met verschillende structuren
Blootstelling aan bepaalde ziektekiem proliferatie van sepcifieke B-cel met herkenning voor dit
antigen (= primaire respons) aanmaak van geheugen B-cellen secundaire respons veel
hardere immuun respons
IgA
IgD
IgE
IgG Belangrijkste humorale component tegen
binnendringende pathogenen. Kan de placenta
passeren om de foetus immunitet te geven
IgM Expressie op oppervlka van B-cellen in een
pentamere vorm meer zeer hoge aviditeit.
Elimineert pathogenen in de vroege stadia van
door B-cellen gemedieerde umuniteit voordat
er voldoende IgG is
Structuur antilichamen
- 2 zware en 2 lichte ketens
- Y vorm met 2 variabele regio’s (FAB) en 1 constant (FC) gedeelte
o Op variabele regio’s kunnen antigenen binden
- Glycosilatie bepaalt de structuur van het FC en bepaalt de FC receptoren die kunnen binden
ter recrutering van effector cellen
- Amino terminus en carboxyl terminus
- Karakteristieken
o Bivalent, heterodimeer
o Disulfide binding
o Linker regio laat beweging toe
, Karakteristieken
- Gevoeligheid
o Detectielimiet (concentratie in pg/ml) betere detectielimiet = lagere limiet
o Afhankelijk van Ka
o Bepaalt de hoeveelheid antigen dat aanwezig moet zijn om een signaal te geven
- Specifiteit
o De mogelijkheid om een specifiek antigen te meten zonder interferentie
o Cave: kruisreactie, contaminanten
- Precisie
o Hoe groot is afwijking/variatie op metingen kleinere standaard afwijking = beter
o Variabiliteit van het testen
Herhaalbaarheid: zelfde persoon, zelfde pipet zelfde resultaten
Reproduceerbaarheid: versch. persoenen en omgeving zelfde resultaten
- Nauwkeurigheid
o Hoe dicht meetresultaten liggen bij de echte waarde
o Afhankelijk van precisie
Specifiteit van het antilichaam
- Niet bepaald door volledige antilichamen: bepaald door Complementaire Determining Regio
o Hypervariabele regio’s
- Epitoop: klein, toegankelijk deel van een macromolecuul dat herkend kan worden door Ab, B-
cellen en T-cellen
- Paratoop : antigeenbindende plaats: onderdeel van Ab dat antigen herkent en eraan bindt
- Idiotype: gedeeld kenmerk tussen groep immunoglobuline‐ of T‐celreceptormoleculen
(TCR) op basis van antigeenbindingsspecifiteit
- Idiotoop :
Wat bepaald de binding tussen epi- en paratoop?
Verzameling ‘zwakke’ niet-covalente bindingen bepalen affiniteit tussen epi- en paratoop
- Waterstof bruggen: Chemische binding waarbij een
waterstof atoom (positief geladen) van een bepaald
molecule wordt aangetrokken door de electronegativiteit ve ander molecule
- Van der Waals krachten: krachten tussen niet‐ gebonden atomen of moleculen
- Hydrofobe binding: De aantrekkingskracht tussen moleculen door de positionering van niet‐
hydrofiele delen van twee twee moleculen
- Electrostatische (Ionische) binding: Valentie binding
tussen twee atomen, aangetrokken door electrostatische krachten, transfer van één of
meerdere elektronen tussen twee atomen
Factoren die de antilichaam-antigen binding beïnvloeden:
1. Temperatuur
De optimale temperatuur voor AgAb reactie zal afhangen van de chemische aard van de epitoop, par
atoop en het type
bindingen dat betrokken is bij hun interactie. De vorming van waterstofbruggen is bijvoorbeeld vaak
exotherm. Deze
bindingen zijn stabieler bij lagere temperatuur en kunnen belangrijker zijn bij het omgaan met koolhy
draatAgs.
2. pH
