Apuntes Anatomía Patológica y Citodiagnóstico

CULTIVOS CELULARES
1. INTRODUCCIÓN
CULTIVO CELULAR: conjunto de procesos que hacen posible
el mantenimiento de cél. de organismos pluricelulares in vitro,
preservando al máximo sus características fisiológicas,
bioquímicas y genéticas.
Lab. en el que tienen lugar  lab. de cultivos celulares
1.1. TIPOS DE CULTIVOS CELULARES
CULTIVO DE ÓRGANOS:
 Mantener órgano entero o parte de él en interfase entre medio de cultivo artificial y
atmósfera controlada
 Se mantienen vivos por un tiempo limitado: tipos celulares diferenciados, estructura
histológica y arquitectura del órgano
 No pueden propagarse  mayor parte de tipos cél. no proliferan  solo hay
crecimiento de cél. indiferenciadas o embrionarias fundamentalmente en zona
periférica que no conservan estructura tisular típica
 Uso:
o Estudiar interacciones y relaciones intercelulares
o Respuestas a estímulos y sustancias
o Estudios regenerativos
o …
CULTIVO DE EXPLANTES:
 Adherir fragmento de tejido a superficie y nutrirlo con medio de cultivo
 Cél. periféricas se multiplican y proliferan, migrando por la superficie del soporte
 Cultivos como: vellosidades coriónicas, tejidos epiteliales…
CULTIVO DE CÉLULAS:
 A partir de suspensiones celulares, que se introducen en recipiente adecuado junto
con medio de cultivo y se incuban en condiciones óptimas para que las cél. proliferen
 Cultivo más habitual, realizado a partir de muestras de cualquier tejido, restos
ovulares, líquido amniótico…
 Según la procedencia de la suspensión celular de partida:
o Cultivo celular primario:
 Suspensión de partida se obtiene disgregando cél. de un tejido por
métodos mecánicos o enzimáticos
 Se obtiene mezcla celular compleja formada por los tipos celulares
del tejido
 Se puede hacer a partir de esta mezcla o seleccionando un tipo celular
concreto
o Cultivo celular secundario:
 Suspensión de partida se obtiene de cultivo primario o de otro
secundario por subcultivo o pase, o por línea celular congelada
1.2. APLICACIONES DE LOS CULTIVOS CELULARES
INVESTIGACIÓN BÁSICA:
 Metabolismo celular
 Interacciones celulares
INVESTIGACIÓN APLICADA:

1

,  Potente herramienta en biotecnología con aplicaciones industriales:
o Inmunología  producir ac monoclonales
o Virología  producir vacunas
o Farmacología  producir fármacos
o Toxicología  estudios de citotoxicidad, carcinogénesis y mutagénesis
APLICACIONES MODERNAS E INTERESANTES:
 Ingeniería de tejidos: conseguir producción in vitro de tejidos (cultivos histotípicos)
y órganos (cultivos órganotípicos)  uso en injertos y trasplantes
 Estudio con cél. madre o stem cells.  uso en terapia celular

2. BIOLOGÍA DE LAS CÉLULAS EN CULTIVO
A las cél. en suspensión se les añade el medio de cultivo, se introducen en recipiente adecuado y
se incuban (óptimas condiciones de Tª y humedad)  cél. crecen
2.1. CURVA DE CRECIMIENTO DEL CULTIVO
Dinámica del crecimiento de un cultivo  concentración de cél. por días de evolución 
representada en curva de crecimiento.
Curva de crecimiento es una curva sigmoide (y=cél. /ml; X: días de cultivo) en la que hay 3 fases:
 Fase de latencia:
o Tramo recto sin pendiente
o Primeras 24 horas
o No hay crecimiento  nº de cél. constante o incluso disminuir poco
 Fase de crecimiento exponencial:
o Recto con pendiente elevada
o Dura 6-7 días
o Nº de cél. aumenta de manera exponencial hasta
llegar a un máximo
 Fase estacionaria:
o Tramo recto de pendiente nula
o A partir de los 6-7 días
o Nº de cél. constante
2.2. FORMAS DE CRECIMIENTO
CRECIMIENTO EN MONOCAPA:
 Cél. crecen adheridas en superficie sólida (plástico o vidrio)
 Cél. dependientes de anclaje  necesitan adherirse a superficie sólida para crecer
 Usado para mayoría de las cél.
 Etapas:
o Adhesión a una superficie: cél. se van adhiriendo. Coincide con periodo de
latencia de la curva.
o Proliferación y formación de colonias: cél. ya pegadas a la pared, empiezan a
proliferar, se expanden por toda la superficie y forman colonias. Coincide con la
fase exponencial de la curva de crecimiento.
o Inhibición por contacto: cél. ocupan toda la superficie disponible y entran en
confluencia estableciendo contacto entra ellas, fenómeno llamado inhibición por
contacto, cél. detienen crecimiento (pero siguen vivas). Inicia fase estacionaria
de la curva  morfología y fisiología de cél. se parecen más a las de las cél. de
origen.
 Para que retomen el crecimiento se hace subcultivo o pase de parte de cél. a nuevo frasco
 momento perfecto es la fase exponencial.

2