Samenvatting gen- en celtechnologie: les 2 basis celcultuur

Inhoud
Cel eigenschappen................................................................................................................................... 2
Celadhesie ........................................................................................................................................... 2
Morfologie- fenotype .......................................................................................................................... 2
Contact en densiteit inhibitie .............................................................................................................. 3
Subcultivatie ............................................................................................................................................ 4
Subcultivatie – splitsen ........................................................................................................................ 4
Subcultivatie: 3 stappen ...................................................................................................................... 4
Subcultivatie – cellen oogsten ............................................................................................................. 5
Subcultivatie – cellen tellen ................................................................................................................ 5
Subcultivatie – cellen uitzaaien ........................................................................................................... 6
Subcultuur suspensie cellen ................................................................................................................ 6
Aantal celdelingen/verdubbelingstijd ................................................................................................. 7
Cel isolatie – starten nieuwe cultuur....................................................................................................... 8
Start materiaal ..................................................................................................................................... 8
Orgaancultuur ..................................................................................................................................... 8
Cel isolatie – explant cultuur ............................................................................................................... 8
Cel isolatie -dissociatie cultuur ............................................................................................................ 9
Celcultuur evolutie .............................................................................................................................. 9
Geïmmortaliseerde celculturen ........................................................................................................ 10
Organotypische celculturen .............................................................................................................. 11
Cryopreservatie ..................................................................................................................................... 11
Celbanken .......................................................................................................................................... 11
Aanmaken cryostock ......................................................................................................................... 11
Principes van cryopreservatie ........................................................................................................... 12




1

, Les 2: basis celcultuur
Cel eigenschappen
Celadhesie

• CAM – cel adhesion molecules
o Transmembraaneiwitten
o Cel-cel interacties
▪ Cadherines: Ca-afhankelijke CAMs
▪ Ig-superfamilie
▪ Selectines (glycoproteïns op membraan)
o Cel-matrix
▪ Integrines: sub-units bepalen type matrix
(grotendeels Ca afhankelijk)
▪ Selectines (glycoproteïns in matrix)

• Cel-cel adhesie:
o Behoud van organisatie binnen weefsel EDTA cheleert calcium
o behoud van celpolariteit ➔ Verbreken cel-cel
• Cel-matrix adhesie: interacties
o reactie van cellen door groei ➔ Individuele cellen
o vormverandering
o activiteit verandering Trypsine knipt integrines
o migratie ➔ Verbreken cel-matrix
o proliferatie interacties
o differentiatie (belang samenstelling ECM) ➔ Adherente cellen
komen los van bodem
Morfologie- fenotype




MESENCHYMAAL/FIBROBLASTACHTIG
- Lang gerekte cellen met uitlopers
- Geen cel/cel contacten
- Cel- matrix interactie

EPITHELIAAL LYMFOBLAST-ACHTIG/SUSPENSIE CELLEN
- Vormen eilanden - Ronde cellen
- Sterke cel/cel contacten - Geen cel/cel contacten
- Cel – matrix interactie - Geen cel-matrix interactie


Verder zullen we zien dat cellen in volgende volgorde worden behandeld:
1) Wasstap op PBS met EDTA → deze stap mag korter bij mesenchymaal/fibroblastachtige cellen
(maar mag niet weggelaten worden omdat serum nog verwijderd moet worden; serum stopt nl.
2
enzymatische reactie van trypsine)
2) Trypsinestap → deze stap mag weggelaten worden bij lymfoblast-achtige/suspensie cellen