Samenvatting - Labo microbiologie II

Hoofdstuk 2, Controle op steriliteit en
bepalen van besmettingsgraad
2.1. Benodigdheden
 Plate count agar (PCA)
Vaste voedingsbodem met weinig agar
 Doorzichtig
 Ringer
Fysiologische zoutoplossing
Ringertablet oplossen in 500 ml aq. dest.
 Brain heart infusion (BHI)
Vloeibare voedingsbodem
 Sabouraud Dextrose Agar (SDA)

2.2. Steriliteitscontrole op materiaal
- Swabmethode
Controle op werktafels, kranen, leidingen
 Steriele swab bevochtigen in ringer
 Draaien over een oppervlak (25 cm2)
 Swab in een steriele oplossing gebracht en geschud
 1 ml van de suspensie overbrengen in een petriplaat
 Hieraan bv. PCA toevoegen
Omgekeerde incubatie bij 37°C
Berekenen van het aantal kiemen per 100 cm2




- Contact- of afdrukmethode
Controle op effen oppervlakten
 Rodacplaatjes gieten met een gekozen voedingsbodem
 Na het stollen een afdruk nemen van het oppervlak
Omgekeerde incubatie bij 37°C
Berekenen van het aantal kiemen per 100 cm2




- Spoelmethode

, Controle op grote recipiënten
 In het recipiënt een hoeveelheid ringeroplossing brengen
 Schudden
 1 ml overbrengen in een petriplaat
 Hieraan bv. PCA aan toevoegen
Bepalen van het aantal kolonies per recipiënt




- Cultuurmethode
Controle van klein materiaal
 Materiaal in de voedingsbodem brengen (cultuurbuisje)
Incubatie op 37°C voor 3, 5, 7 dagen
Bekijken of er al dan niet groei in op de voedingsbodem




2.3. Microbiologische controle van lucht
- Sedimentatiemethode (Fall out)
Bepalen van de aan- of afwezigheid van micro-organismen
 Platen in een ruimte ergens open zetten
Op PCA voor aantal kiemen
Op SDA voor gisten en schimmels
- Surface air system (S.A.S.)
De lucht wordt door een geperforeerd oppervlak gedurende een bepaalde tijd aangezogen
Incubatie voor 48 uur op 37°C voor PCA
Incubatie voor 5 dagen op 25 °C voor SDA
Berekenen van het aantal kiemen per volume eenheid lucht (m3)
Indien de aangezogen lucht 500 l bedraagt
 Maal 2= kiemgetal per m3 lucht
Referentiewaarden:
 Volgens Galson en Goddard:
In een operatiezaal: niet meer dan 35 – 70 micro-organismen per m3
In ziekenzalen: niet meer dan 150 – 250 micro-organismen per m3
Algemeen: maximum 150 – 300 micro-organismen per m3

,Hoofdstuk 3, Identificatie van een bacterie
3.1. Isoleren
Voorwaarde starten identificatie: aanleggen van een reincultuur

3.2. Identificeren
3.2.1. Macroscopische kenmerken
Om dit te interperteren, moet er meer geweten worden over de voeding, zuurstofnood, temperatuur,
…
Voeding onderscheidt 2 soorten:
1. Autotrofe bacteriën
Op bouwen van organische stoffen vanuit anorganische stoffen
Door: oxidatie reacties
2. Heterotrofen
Verkrijgen energie door de afbraak van organische stoffen
Door: enzymen
 Bodemmateriaal moet van organisch materiaal zijn
Deze komen uit:
- Extracten
Meestal vleesextract
- Pepton
Aanvullende stikstof bron
Verkregen uit eiwitten die zich omzetten door enzymen
Nog onderscheid:
a) Saprofyten
Leven van dood organisch materiaal
 Verrotting en vergisting
b) Commensalen
Leven op fysiologische verblijfplaats zonder schade aan te richten
 Ze kunnen zelf vitaminen kweken
c) Symbionten
Nuttige bacteriën bij lagere diersoorten die leven onder wederzijds profijt van de
gastheer
d) Parasieten
Leven op levende lichaamscellen die ze kunnen beschadigen of vernietigen
 Infecties
Essentiële voorwaarde voor een ongestoorde osmose is:
Isotonisch middel toevoegen
Zoals:
NaCl
Samenstelling eenvoudige voedingsbodem:
- Vleesextract
- Pepton
- NaCl
- Water
Agar

, = product afkomstig van zee-algen
 Weinig of geen voedende waarde
 1,5 g  1L
 Smeltpunt: 90-95°C
Gelatine
= product afkomstig van beenderen
 100-150 g  1L
 Smeltpunt: 25-27°C
Nadeel: kan maar geïncubeerd worden bij 22°C, anders smelt hij
 Nog een nadeel:
Sommige bacteriën kunnen trypsine omvormen
 Voedingsbodem zal vloeibaar worden
3.2.1.1. Kolonie-uitzicht op de plaat
Ontstaan kolonie= een kiem gaat zich steeds verder delen in dochtercellen die bij elkaar blijven liggen
Kolonie= 1 soort bacterie= reincultuur
Beoordeling gemaakt op het uitzicht van een kolonie:
- Zijn er meerdere bacteriesoorten aanwezig?
- Welke bacteriesoort vermoedelijk gegroeid is
Voorwaarden om een kolonie te zijn:
 Kolonie moet aan het oppervlak gegroeid zijn
 Kolonie moet afzonderlijk gelegen zijn
 Kolonie moet volgroeid zijn
Kolonie kenmerken:




3.2.1.2. Kolonie-uitzicht in een agarbodem
Rechte stolling
Steekent:
 Groei-intensiteit
Veel informatie over de zuurstofbehoeften
 Groei enkel bovenaan
De bacteriën hebben behoefte aan zuurstof om zicht te ontwikkelen
= obligaat aeroben
 Groei enkel onderaan
De bacteriën kunnen geen zuurstof verdragen
= obligaat anaeroben