Samenvatting Plasma 3 voorbereiding bio-analytisch practicum

 PLASMA 3: Bepaling van fenylalanine in plasma


STAP 1: Het maken van de spike oplossingen (= verdunningen
fenylalanine)

Fenylalanine standaard (1mg/mL)  klein bruin flesje

Maak gebruik van glazen pipetten

Klein volume in groot volume pipetteren

Goed vortexen!! (Homogeniseren)

Ronde proefbuizen gebruiken, geen centrifugeer proefbuizen
(contaminant aanwezig)



STAP 2: De standaarden

Controleer de volumes van de automatische pipettor bij elke stap!

Pipetteren gebeurt in 1 stap. (bv. pipetteer 400µl in 1 keer en niet 4X
100µl)

Pipetteer eerst Blanco BSA in elke proefbuis.

Bij het spiken van de spike oplossing, de pipettip net boven de BSA-
oplossing houden bij het uitduwen, en niet bovenaan de proefbuis.

Telkens een nieuwe tip gebruiken voor elke standaard.

Goed mengen, geen parafilm gebruiken en niet vortexen (schuimvorming)

 Homogeniseren!



STAP 3: Proteïne precipitatie

Waarom proteïne precipitatie: staal opzuivering, eiwitten laten neerslaan

Respecteer de volgorde van het protocol!

Proefbuizen goed labelen.

Goed vortexen voor de centrifugatie stap

Centrifuge in evenwicht opvullen

 De centrifuge enkel openen als het oranje lichtje brand!

Indien supernatans niet helder is nog eens centrifugeren.