TWMA 6- LAS TÉCNICAS DE PCR
1. REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA
Def:es una técnica in vitro de amplificación de ADN que permite obtener millones
de copias iguales de un fragmento concreto de ADN, partiendo de una cantidad
mínima de ADN molde
El desarrollo posterior de la técnica ha permitido amplificar fragmentos de gran
tamaño (hasta 35klg) y se han desarrollado diferentes variantes que permiten:
• Amplificar varios fragmentos distintos en una única reacción
• Amplificar fragmentos de ARN (RT-ADN)
• Cuantificar la concentración de una molécula concreta de ácido nucleico
presente en una muestra (PCR cuantitativa, PCR a tiempo real)
Ventajas:
• Como técnica de amplificación: respecto a las técnicas de clonación en
vectores mediante tecnología de ADN recombinante suponen un
considerable ahorro de tiempo (la PCR tiene lugar en horas mientras que la
clonación requiere días de trabajo) y además están completamente
automatizados (la clonación es un proceso manual)
• Como técnica de detección: respecto a las técnicas de hibridación la PCR
requiere una cantidad de muestra mucho menor y además permite la
cuantificación de secuencias concretas (PCR en tiempo real)
Aplicaciones:
• El diagnóstico y pronóstico de ciertas enfermedades
• La evolución y respuesta a tratamientos
• Los estudios de expresión génica
• Mutagénesis
• Estudios filogenéticos
• Genotipo
• Medicina forense
2. BASES TEÓRICAS DE LA PCR
La PCR es un proceso enzimático catalizado por una ADN polimerasa basado en la
replicación del ADN
1. REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA
Def:es una técnica in vitro de amplificación de ADN que permite obtener millones
de copias iguales de un fragmento concreto de ADN, partiendo de una cantidad
mínima de ADN molde
El desarrollo posterior de la técnica ha permitido amplificar fragmentos de gran
tamaño (hasta 35klg) y se han desarrollado diferentes variantes que permiten:
• Amplificar varios fragmentos distintos en una única reacción
• Amplificar fragmentos de ARN (RT-ADN)
• Cuantificar la concentración de una molécula concreta de ácido nucleico
presente en una muestra (PCR cuantitativa, PCR a tiempo real)
Ventajas:
• Como técnica de amplificación: respecto a las técnicas de clonación en
vectores mediante tecnología de ADN recombinante suponen un
considerable ahorro de tiempo (la PCR tiene lugar en horas mientras que la
clonación requiere días de trabajo) y además están completamente
automatizados (la clonación es un proceso manual)
• Como técnica de detección: respecto a las técnicas de hibridación la PCR
requiere una cantidad de muestra mucho menor y además permite la
cuantificación de secuencias concretas (PCR en tiempo real)
Aplicaciones:
• El diagnóstico y pronóstico de ciertas enfermedades
• La evolución y respuesta a tratamientos
• Los estudios de expresión génica
• Mutagénesis
• Estudios filogenéticos
• Genotipo
• Medicina forense
2. BASES TEÓRICAS DE LA PCR
La PCR es un proceso enzimático catalizado por una ADN polimerasa basado en la
replicación del ADN
