samenvatting enzymologie

Enzymologie samenvatting
Herhaling
 EIWIT
 KATALYSATOR
 Globulair wateroplosbaar
 Versnellen de reactie 109 tot 1014 maal
 Katalyseren elke chemische reactie in organisme
 Worden niet verbruikt
 Komen voor in lage conc. 10-11 M
o Worden niet verbruikt dus weinig nodig
 Worden na verloop van tijd vervangen
 Lage temp, neutrale pH (37°C)
o Elk enzym heeft optimale T en pH
 Denatureren
o Tertaire structuur gaat verloren doordat interacties tussen zijketens en aminozuren
verloren gaan

Werking
Katalytische werking
 Enzym verlaagt activeringsenergie waardoor reactie sneller
kan gaan
 Verlaging door moleculen optimaal te plaatsen voor reactie
 Actief centrum regelt optimale plaatsing



Actief centrum
 Sleutel slot
o Rigide structuur, zeer specifiek
 Induced fit
o Enzym past zich aan aan reagens
 In realiteit combinatie van 2 aanwezig



Specificiteit
 Reactie: 1 per enzym
 Substraatafhankelijk
 Zwakke specificiteit / Groepsspecificiteit
o Minder specifiek, reactie met een type groep
o Bv: ligases, ploymerases
 Absolute specificiteit
o Zeer kieskeurig

,Controlemechanismen
 Controle via synthese
o Lichaam maakt stoffen aan die synthese van enzymen activeren
 Controle via wijzigingen in de covalente structuur
o Enzymen worden door wijzigingen geactiveerd op de plaats waar ze moeten werken
 Allosterische controle
o Binding op allerostersche site brengt verandering
o Activator: active site verandert en enzym kan beginnen werken
o Inhibitor: active site verandert waardoor enzym niet meer werkt
o Zowel reversibel als irreversibel mogelijk




Beinvloeden van enzymwerking
Temperatuur
 Elke enzym heeft optimale temperatuur
 Te laag: niet genoeg energie om reactie te starten
 Te hoog: denaturatie

pH
 Elk enzym heeft optimale pH
o Werking met buffers
 Te hoog en te laag: denaturatie

Enzymconcentratie
 Hoe meer enzymes hoe sneller de reactie indien er overmaat aan
substraat is

Substraatconcentratie
 Snelheid wordt constant in tijd
 Michaelis-Menten vgl

Inhibitoren
 Competitief:
o inhibitor lijkt op enzym + bindt op actief centrum
 Niet Competitief
o bindt enzym op andere plek dan actieve site, maar deze binding wijzigt actieve site

,Enzymkinetiek
algemeen




K4 is mogelijk in theorie: zeer nadelig in praktijk



 S= substraat: neemt na tijd af
 P= product: neemt toe met tijd
 E= enzym: concentratie neemt af met
tijd
 ES= enzymsubstraat: neemt toe




Evenwicht tussen E en ES
Steady state= er wordt evenveel ES gevormd als afgebroken = enigste tijd dat er iets gezegd kan
worden over enzym
Pre-stady stade= meer ES gevormd als afgebroken
Post steady stade= meer ES afgebroken als gevormd

Michaelis-Menten vergelijking
 Bij steady state
 Totale enzymconcentratie: [ Et ] =[ E ] + [ ES ]

Michaelis-Menten constante

, Enzymconcentratie



Michaelis-Menten vergelijking




Vereenvoudigde Michaelis-Menten




 enkel als alle enzymen verzadigd zijn

MM-curve




 substraatconcentratie niet gekend?
o Bij zeer lage concentratie gaan werken om concentratie te berekenen
 Enzymconcentratie niet gekend?
o Bij hoge concentratie gaan werken om enzymconcentratie te berekenen


Betekenis van Parameters
KM
 Afhankelijk van : Enzym, Substraat, pH, Temperatuur, Ionensterkte
o Hoe kleiner KM= hoe groter de affiniteit
v max
 [ S ] waarbij v =
2
o Helft van actieve centra gebonden aan substraat
o Fractie van bezette actieve centra bepalen
[ S]
 Y=
K M [S]
 Dissociatieconstante