Methoden in biomedisch onderzoek
Hoofdstuk 6: Elementaire basistechnieken
Pipetteren
Volume pipet: afmeten van 1 bepaald volume
TD (bevat effectief 10 ml ook als het wordt leeggelopen)
TC (pipet bevat 10 ml, leeglopen dan geen 10 ml)
Gegradueerde pipet: schaalverdeling (meerder volumes mogelijk)
Pasteurpipet: niet-geijkt druppelaar
Micropipet: met zuiger en luchtkamer -> vacuüm gecreëerd dor verticale beweging van de zuiger in
een luchtdichte schacht -> luchtverplaatsing in tip waardoor ingestelde volume vloeistof w
aangezogen -> overbrengen naar het recipiënt
Rode lijn = de komma
Systematische fouten:
Afhankelijk van volume (juiste pipet kiezen)
Kalibratie + goed onderhoud:
Zelf: water pipeteren en wegen
Firma: certificaat
Fouten door de omgeving:
Temperatuur (constant houden)
Luchtvochtigheid (beperken door vooraf enkele malen te pipeteren)
Fouten door de onderzoeker:
Onnauwkeurigheid, onoplettendheid
Foute instelling
Problemen:
Kwaliteit van tips !! -> hoeveelheid er achter blijft
Viscositeit ( moeilijk te pipeteren)
- Reverse pipetteren
- Positive displacement pipetten
Cross-contaminatie: filtertips pipetten (duurt lang)
Verdunningen
Berekening: C 1 . V1 = C2 . V2
Seriële verdunning:
Herhaalde verdunning vn oplossing (bv: 2-voudige verdunningsreeks)
Wat bepalen?
- Eindvolume
- Verdunningsfactor
Hoeveel geconcentreerde stof overbrengen?
, Verdunningsreeks: eindvolume / x-1
Hoeveel buffer doe je in elk buisje?
Hoeveelheid buffer = eindvolume
Toepassingen verdunningsreeks
Microbiologie
Opstellen kalibratielijn
Meetbaar bereik assay bepalen
Wegen
Bovenweger
Nauwkeurig tot op 50 mg
Geen bescherming tegen tocht
Analytische balans
Nauwkeurig tot op 0,1 – 0,5 mg
Bescherming tegen tocht -> omkasting
Regelmatig onderhoud
Semi-microbalans
Nauwkeurig tot 10 µg
Zeer gespecialiseerde toepassingen
Bescherming tegen tocht -> scherm
Regelmatig onderhoud
Microbalans
=kwartskristalmicrobalans
Nauwkeurig 0,1 tot 1 µg
Zeer gespecialiseerde toepassingen
Bescherming tegen tocht -> scherm
Regelmatig onderhoud
Gebruik weegschaal
1. Welke?
2. Keuze recipient
3. Zet weegschuitje op de weegschaal ->wachten tot gewicht stabiel is
4. Afwegen met spatel
5. Schermen afsluiten -> gewicht laten stabiel worden
6. Noteren
7. Product in ander weegschuitje? -> overbrengen + naspoelen met water
8. Alles opruimen
Extra aandachtspunten bij gebruik weegschaal:
Stabiele ondergrond
Balans -> perfect horizontaal
Vermijd tocht
Vermijd temperatuur en vochtigheidsschommelingen
Hoofdstuk 6: Elementaire basistechnieken
Pipetteren
Volume pipet: afmeten van 1 bepaald volume
TD (bevat effectief 10 ml ook als het wordt leeggelopen)
TC (pipet bevat 10 ml, leeglopen dan geen 10 ml)
Gegradueerde pipet: schaalverdeling (meerder volumes mogelijk)
Pasteurpipet: niet-geijkt druppelaar
Micropipet: met zuiger en luchtkamer -> vacuüm gecreëerd dor verticale beweging van de zuiger in
een luchtdichte schacht -> luchtverplaatsing in tip waardoor ingestelde volume vloeistof w
aangezogen -> overbrengen naar het recipiënt
Rode lijn = de komma
Systematische fouten:
Afhankelijk van volume (juiste pipet kiezen)
Kalibratie + goed onderhoud:
Zelf: water pipeteren en wegen
Firma: certificaat
Fouten door de omgeving:
Temperatuur (constant houden)
Luchtvochtigheid (beperken door vooraf enkele malen te pipeteren)
Fouten door de onderzoeker:
Onnauwkeurigheid, onoplettendheid
Foute instelling
Problemen:
Kwaliteit van tips !! -> hoeveelheid er achter blijft
Viscositeit ( moeilijk te pipeteren)
- Reverse pipetteren
- Positive displacement pipetten
Cross-contaminatie: filtertips pipetten (duurt lang)
Verdunningen
Berekening: C 1 . V1 = C2 . V2
Seriële verdunning:
Herhaalde verdunning vn oplossing (bv: 2-voudige verdunningsreeks)
Wat bepalen?
- Eindvolume
- Verdunningsfactor
Hoeveel geconcentreerde stof overbrengen?
, Verdunningsreeks: eindvolume / x-1
Hoeveel buffer doe je in elk buisje?
Hoeveelheid buffer = eindvolume
Toepassingen verdunningsreeks
Microbiologie
Opstellen kalibratielijn
Meetbaar bereik assay bepalen
Wegen
Bovenweger
Nauwkeurig tot op 50 mg
Geen bescherming tegen tocht
Analytische balans
Nauwkeurig tot op 0,1 – 0,5 mg
Bescherming tegen tocht -> omkasting
Regelmatig onderhoud
Semi-microbalans
Nauwkeurig tot 10 µg
Zeer gespecialiseerde toepassingen
Bescherming tegen tocht -> scherm
Regelmatig onderhoud
Microbalans
=kwartskristalmicrobalans
Nauwkeurig 0,1 tot 1 µg
Zeer gespecialiseerde toepassingen
Bescherming tegen tocht -> scherm
Regelmatig onderhoud
Gebruik weegschaal
1. Welke?
2. Keuze recipient
3. Zet weegschuitje op de weegschaal ->wachten tot gewicht stabiel is
4. Afwegen met spatel
5. Schermen afsluiten -> gewicht laten stabiel worden
6. Noteren
7. Product in ander weegschuitje? -> overbrengen + naspoelen met water
8. Alles opruimen
Extra aandachtspunten bij gebruik weegschaal:
Stabiele ondergrond
Balans -> perfect horizontaal
Vermijd tocht
Vermijd temperatuur en vochtigheidsschommelingen
