Samenvatting les ELISA

ELISA
Antilichamen
 Eiwitten gesecreteerd door B-ly in gewervelde dieren
 Herken en bindt aan AG op vreemde deeltjes -> markeren -> vernietigen door T-ly
 Elk AG kan verschillende AL genereren voor verschillende epitopen op een AG

Monoklonale AL productie




Productie secundaire AL




1

,AG-AL interactie
-> H-bruggen, ionische bindingen, van der waals interacties, hydrofobische interacties

Immunoassays
Definitie: AL als reagentia, gebruik AL met hoge antilichaamaffiniteit (Ka)
AL laten binden met AG

Ka
AL + AG <-> AL * AG

Controle: geen AL
In compartiment A zitten geen AG en in
compartiment B zitten alle AG
-> na verloop van tijd zijn in A en B
evenveel AG aanwezig
Expermiment: in A zitten AL
-> verwachting: evenveel AG in A als B
-> klopt niet: aantal vrije AG verminderd
in A omdat deze aan AL zijn gebonden
B: vrij AG
A: vrij AG en gebonden AG




Bij evenwicht is Ka een affiniteitsconstante




2

, Immunoassays: kenmerken
 Gevoeligheid
o Detectiegrens (concentratie in pg/ml)
o Afhankelijk van Ka
 Specificiteit
o Mogelijkheid om een specifiek AG te meten (vrij van interferentie)
o Cave: kruisreactie, verontreiniging
 Precisie
o Standaardafwijking van gemiddelde
o Variabiliteit van testen, reproduceerbaarheid (ander labo), herhaalbaarheid (in
hetzelfde labo met dezelfde persoon)
 Nauwkeurigheid
o Hoe dicht ligt de gemeette waarde bij de werkelijke waarde -> afhankelijk van
precisie en specificiteit

Types immunoassays
1. Precipitatie methode:
-> immuundiffusie
-> immuunelectroforese
2. Gelabelde AL methode:
-> radioimmunoassay (RIA)
-> fluorescentie immunoassay (FIA)
-> enzym immunoassay (EIA)

Immunodiffusie




3