Microscopie
Resolutie is het vermogen om een zo klein mogelijke afstand tussen twee objecten nog te kunnen
onderscheiden van elkaar.
0,61 × λ
Resolutie=
n ×sin (α )
λ=golflengten=brekingsindexn ×sin ( α )=nummerieke appertuur ( hoek van invallende licht )
Cellen houdbaar maken: fixeren, coupes snijden, kleuren
Blauw: lage golflente en veel energie
Rood: hoge golflengte minder energie
De kleur die zichtbaar is, wordt door de kleurstof het meest
weerkaatst. En de andere kleuren worden geabsorbeerd.
Haematoxyline Eosine (HE-kleuring)
Eosine (negatief) is een licht roze-oranje kleurstof om eiwitten
aan te kleuren.
Haematoxyline (positief) (blauw-zwart) wordt veel gebruikt om nucleïnezuren aan te kleuren.
Florescentie
Bij een fluorescerend beeld geeft het object zelf licht. De kleurstof wordt bestraald met excitatie
licht, hierdoor raken de elektronen van de kleurstof in een aangeslagen toestand en als de
elektronen terugvallen dan zenden zij emissie licht uit (hogere golflengte)
Opvallend in een fluorescentiemicroscoop is de lichtweg. Deze komt vanaf de lamp via het
excitatiefilter via het objectief op het preparaat. Het excitatie filter zorgt voor de juiste golflengte van
de excitatie licht. Deze route, via het objectief zorgt voor de belichting van een heel klein deel van
het preparaat. Daarnaast hoeft het excitatie- en emissie-licht niet door het preparaat heen.
De dichromatische spiegel zorgt ervoor dat alleen de emissie licht (het geëmitteerde licht) het oculair
van de microscoop bereikt. Het emissie filter is een extra filter mocht de dichromatische spiegel toch
licht van andere golflengten doorlaten. De achtergrond van het microscopisch beeld van een
fluorescentiemicroscoop is dus zwart/donker.
,GFP is green fluorescent eiwit dat in het DNA gezet kan worden.
CLSM
Een soort fluorescentiemicroscoop, maar dan met een laser.
Fasecontrastmicroscoop
maakt gebruik van dat licht in een medium met een hogere refractie
index langzamer beweegt. Hierdoor
ontstaan faseverschillen.
Elektronenmicroscopie
kathode-anode
vacuüm
Lenzen
Elektromagnetische lenzen
De coupes mogen slechts 50 tot 100nm zijn
, Grid geeft stevigheid (metaal) en het is geplastificeerd
Cellen worden met zware metalen gekleurd
TEM
Door weefsel de bevriezen met vloeibaar stikstof dan behoud je de celstructuur.
SEM
3D
bevriezen -> drogen -> metaalbedekking
Resolutie is het vermogen om een zo klein mogelijke afstand tussen twee objecten nog te kunnen
onderscheiden van elkaar.
0,61 × λ
Resolutie=
n ×sin (α )
λ=golflengten=brekingsindexn ×sin ( α )=nummerieke appertuur ( hoek van invallende licht )
Cellen houdbaar maken: fixeren, coupes snijden, kleuren
Blauw: lage golflente en veel energie
Rood: hoge golflengte minder energie
De kleur die zichtbaar is, wordt door de kleurstof het meest
weerkaatst. En de andere kleuren worden geabsorbeerd.
Haematoxyline Eosine (HE-kleuring)
Eosine (negatief) is een licht roze-oranje kleurstof om eiwitten
aan te kleuren.
Haematoxyline (positief) (blauw-zwart) wordt veel gebruikt om nucleïnezuren aan te kleuren.
Florescentie
Bij een fluorescerend beeld geeft het object zelf licht. De kleurstof wordt bestraald met excitatie
licht, hierdoor raken de elektronen van de kleurstof in een aangeslagen toestand en als de
elektronen terugvallen dan zenden zij emissie licht uit (hogere golflengte)
Opvallend in een fluorescentiemicroscoop is de lichtweg. Deze komt vanaf de lamp via het
excitatiefilter via het objectief op het preparaat. Het excitatie filter zorgt voor de juiste golflengte van
de excitatie licht. Deze route, via het objectief zorgt voor de belichting van een heel klein deel van
het preparaat. Daarnaast hoeft het excitatie- en emissie-licht niet door het preparaat heen.
De dichromatische spiegel zorgt ervoor dat alleen de emissie licht (het geëmitteerde licht) het oculair
van de microscoop bereikt. Het emissie filter is een extra filter mocht de dichromatische spiegel toch
licht van andere golflengten doorlaten. De achtergrond van het microscopisch beeld van een
fluorescentiemicroscoop is dus zwart/donker.
,GFP is green fluorescent eiwit dat in het DNA gezet kan worden.
CLSM
Een soort fluorescentiemicroscoop, maar dan met een laser.
Fasecontrastmicroscoop
maakt gebruik van dat licht in een medium met een hogere refractie
index langzamer beweegt. Hierdoor
ontstaan faseverschillen.
Elektronenmicroscopie
kathode-anode
vacuüm
Lenzen
Elektromagnetische lenzen
De coupes mogen slechts 50 tot 100nm zijn
, Grid geeft stevigheid (metaal) en het is geplastificeerd
Cellen worden met zware metalen gekleurd
TEM
Door weefsel de bevriezen met vloeibaar stikstof dan behoud je de celstructuur.
SEM
3D
bevriezen -> drogen -> metaalbedekking
