Subcellulaire localisatie LDH en GDH in
kippenlever
Voorbereidingsvragen
1. Beschrijf de metabole functie van LDH en GDH in de leverparenchymcel.
De metabole functie van lactaat dehydrogenase (LDH) is het oxideren van lactaat naar pyruvaat.
Hierbij wordt NAD+ omgezet in NADH + H+ . De reactie is reversibel, wat betekent dat hij ook
andersom kan plaatsvinden. Hierbij wordt er van pyruvaat lactaat gemaakt en wordt NADH + H+
omgezet in NAD+
De metabole functie van glutamaat dehydrogenase (GDH) is het katalyseren van de omzetting van
glutamaat in α-ketoglutaraat en vice versa. Bij de reactie van glutamaat naar α-ketoglutaraat is H2O
nodig en NAD(P)+. Hierbij wordt α-ketoglutaraat gevormd samen met NH4+ + NAD(P)H,H+. Dit
ammonia gaat de ureumcyclus in. Andersom zijn deze producten natuurlijk nodig om glutamaat te
vormen uit α-ketoglutaraat. Deze reactie vindt niet plaats in zoogdieren, omdat het GDH-evenwicht
richting de ammonia en a-ketoglutaraat productie ligt. GDH heeft een hele lage affiniteit voor
ammonia en er zou een toxische hoeveelheid ammonia in het lichaam aanwezig moeten zijn om de
reactie de andere kant op te laten lopen.
2. Wat is bekend over de subcellulaire localisatie van LDH en GDH in de levercel?
De omzetting van lactaat naar pyruvaat houdt de glycolyse draaiende. De glycolyse vindt plaats in het
cytosol van de cel, dus LDH bevindt zich in het cytosol.
GDH wordt gelokaliseerd in de mitochondriën, waar het het product van α-ketoglutaraat vormt wat
een intermediair is in de Krebscyclus. De concentratie GDH wordt gemeten om de leverfunctie te
bepalen. Een verhoogde concentratie van GDH kan duiden op lever schade.
3. Stel een formule op hoe je het latentie% berekent uit twee meetgegevens: Δ A per minuut
zonder triton en Δ A per minuut met triton. (laat je antwoord controleren door een assistent)
De totale latentie kan berekend worden door (deel/geheel) x100% te doen
Geheel: ΔAmet Triton
Deel: ΔAmetTriton - ΔAzonderTriton
Dus latentie% = ((ΔAmetTriton - ΔAzonderTriton) / ΔAmet Triton) x100%
4. Geef in onderstaande tabel welke proef uitkomsten je verwacht voor de latentie % (lat) en de
recovery % (rec) van LDH en GDH in de PNS, de cytosol en de mitochondriale fractie. Ga daarbij
drie mogelijke situaties na. Links: alle mitochondriën zijn tijdens de slacht, het bewaren en het
homogeniseren van de levers heel gebleven en nog in het homogenaat (PNS) in intacte vorm
1
kippenlever
Voorbereidingsvragen
1. Beschrijf de metabole functie van LDH en GDH in de leverparenchymcel.
De metabole functie van lactaat dehydrogenase (LDH) is het oxideren van lactaat naar pyruvaat.
Hierbij wordt NAD+ omgezet in NADH + H+ . De reactie is reversibel, wat betekent dat hij ook
andersom kan plaatsvinden. Hierbij wordt er van pyruvaat lactaat gemaakt en wordt NADH + H+
omgezet in NAD+
De metabole functie van glutamaat dehydrogenase (GDH) is het katalyseren van de omzetting van
glutamaat in α-ketoglutaraat en vice versa. Bij de reactie van glutamaat naar α-ketoglutaraat is H2O
nodig en NAD(P)+. Hierbij wordt α-ketoglutaraat gevormd samen met NH4+ + NAD(P)H,H+. Dit
ammonia gaat de ureumcyclus in. Andersom zijn deze producten natuurlijk nodig om glutamaat te
vormen uit α-ketoglutaraat. Deze reactie vindt niet plaats in zoogdieren, omdat het GDH-evenwicht
richting de ammonia en a-ketoglutaraat productie ligt. GDH heeft een hele lage affiniteit voor
ammonia en er zou een toxische hoeveelheid ammonia in het lichaam aanwezig moeten zijn om de
reactie de andere kant op te laten lopen.
2. Wat is bekend over de subcellulaire localisatie van LDH en GDH in de levercel?
De omzetting van lactaat naar pyruvaat houdt de glycolyse draaiende. De glycolyse vindt plaats in het
cytosol van de cel, dus LDH bevindt zich in het cytosol.
GDH wordt gelokaliseerd in de mitochondriën, waar het het product van α-ketoglutaraat vormt wat
een intermediair is in de Krebscyclus. De concentratie GDH wordt gemeten om de leverfunctie te
bepalen. Een verhoogde concentratie van GDH kan duiden op lever schade.
3. Stel een formule op hoe je het latentie% berekent uit twee meetgegevens: Δ A per minuut
zonder triton en Δ A per minuut met triton. (laat je antwoord controleren door een assistent)
De totale latentie kan berekend worden door (deel/geheel) x100% te doen
Geheel: ΔAmet Triton
Deel: ΔAmetTriton - ΔAzonderTriton
Dus latentie% = ((ΔAmetTriton - ΔAzonderTriton) / ΔAmet Triton) x100%
4. Geef in onderstaande tabel welke proef uitkomsten je verwacht voor de latentie % (lat) en de
recovery % (rec) van LDH en GDH in de PNS, de cytosol en de mitochondriale fractie. Ga daarbij
drie mogelijke situaties na. Links: alle mitochondriën zijn tijdens de slacht, het bewaren en het
homogeniseren van de levers heel gebleven en nog in het homogenaat (PNS) in intacte vorm
1
