Naam: Maren Stijnen Naam partner: Lieke Boukens
Studentnummer: 2855992 Assistent: Charelle Schubert, Ruud Visser
Groep: 0610 E
Datum: 30-10-2020
Gebruik van Bradford- en ONPG-assay voor de bepaling van
de enzymactiviteit van His6-β-galactosidase
, Abstract
Dit is het verslag van het onderzoek naar His6-β-galactosidase. In dit onderzoek zijn
verschillende experimenten uitgevoerd. Deze zijn uitgevoerd met het doel om de specifieke
activiteit van His6-β-galactosidase te bepalen. Dit is gedaan met een ONPG-assay. Hiernaast is
de hoeveelheid opbrengst His6-β-galactosidase bepaald. Dit is gedaan met behulp van een
Bradford-assay. Voorafgaand aan het experiment is een Bradford-assay uitgevoerd.
Ten eerste is het His6-β-galactosidase uit Escherichia coli cellen gehaald, vervolgens is het door
middel van affiniteitschromatografie gezuiverd. Dit zuiveringsproces is goed verlopen, en er is
zuiver His6-β-galactosidase overgebleven.
Aan de hand van de Bradford-assay is gebleken dat veel His6-β-galactosidase verloren is
gegaan. Aan het begin was 57,75 mg van het eiwit aanwezig, na alle zuiveringsstappen was er
slechts 5,46 mg over. Dit is logisch, omdat er veel stappen waren waarbij eiwit verloren kan
zijn gegaan.
Studentnummer: 2855992 Assistent: Charelle Schubert, Ruud Visser
Groep: 0610 E
Datum: 30-10-2020
Gebruik van Bradford- en ONPG-assay voor de bepaling van
de enzymactiviteit van His6-β-galactosidase
, Abstract
Dit is het verslag van het onderzoek naar His6-β-galactosidase. In dit onderzoek zijn
verschillende experimenten uitgevoerd. Deze zijn uitgevoerd met het doel om de specifieke
activiteit van His6-β-galactosidase te bepalen. Dit is gedaan met een ONPG-assay. Hiernaast is
de hoeveelheid opbrengst His6-β-galactosidase bepaald. Dit is gedaan met behulp van een
Bradford-assay. Voorafgaand aan het experiment is een Bradford-assay uitgevoerd.
Ten eerste is het His6-β-galactosidase uit Escherichia coli cellen gehaald, vervolgens is het door
middel van affiniteitschromatografie gezuiverd. Dit zuiveringsproces is goed verlopen, en er is
zuiver His6-β-galactosidase overgebleven.
Aan de hand van de Bradford-assay is gebleken dat veel His6-β-galactosidase verloren is
gegaan. Aan het begin was 57,75 mg van het eiwit aanwezig, na alle zuiveringsstappen was er
slechts 5,46 mg over. Dit is logisch, omdat er veel stappen waren waarbij eiwit verloren kan
zijn gegaan.
