Samenvatting technieken lEV

TECHNIEKEN LEV

Reinstrijken

Principe: Een bacterie uit een bacteriecultuur isoleren en verdunnen om er vervolgens
zuivere kolonies uit te laten groeien. Hierdoor kun je een mengsel van bacteriën
scheiden tot zuivere culturen die je dan kunt onderzoeken.

Materialen

- 2 öses
- Plaat
- Bacteriecultuur

Methode

Vaste cultuur

1. Beschrijf de plaat
2. Pak met öse 1 bacteriën uit bacteriecultuur
3. Maak vier strepen met de öse
4. Draai de öse om, draai de plaat een kwart slag en maak vier nieuwe strepen, de
eerste twee gaan door de laatste twee van de vorige vier.
5. Pak een nieuwe öse en draai de plaat, maak vier nieuwe strepen eerste twee
door de laatste twee
6. Draai de öse, draai de plaat en maak vier nieuwe strepen eerste twee door de
laatste twee.

Vloeibare cultuur

1. Beschrijf de plaat
2. Doop een öse in de bacterie cultuur
3. Maak met de öse vier strepen op de plaat
4. Pak een nieuwe öse en maak vier nieuwe strepen waarbij de eerste twee door de
laatste twee gaan.
5. Pak een nieuwe öse en maak vier nieuwe strepen waarbij de eerste twee door de
laatste twee gaan.
6. Draai de öse om en maak vier nieuwe strepen waarbij de eerste twee door de
laatste twee gaan.



Seriële verdunning maken

Formule: Vpip = Vnodig/Vf (verdunningsfactor)

Als er minimaal nodig staat, mag je eind volume meer zijn dan dat je nodig hebt. Als dit
er niet staat moet je op het precieze getal uit komen na het pipetteren.
1

,Vnodig is altijd meer dan je eindvolume.



Methode:

1. Bereken Vpip met de formule
2. Vul je buisjes met demiwater (kijk goed naar hoeveel je nodig hebt)
3. Pipetteer stock in buisje 1, meng het door naar de eerste stop te pipetteren
4. Pipetteer Vpip van buisje 1 naar buisje 2, meng het
5. Enzo tot laatste buisje



Parallelle verdunningsreeks

Formule: C1 x V1 = C2 x V2

C1= concentratie stockoplossing

V1= volume aanwezig

C2= concentratie nodig (eind concentratie)

V2= Volume nodig ( eind volume)

Vaak moet je V1 berekenen.

Methode:

1. Bereken wat je nodig hebt volgens de formule
2. Pipetteer elk buisje vanuit de stockoplossing. Pak niets uit een ander buisje!



Kiemgetal bepalen

Formule: Geteld getal x hoeveelheid bacteriesuspensie in ml / verdunning

Ongeldig als geteld getal < 30 of > 300.



Morfologische verschillen

Uiterlijke verschillen op basis van: Grootte, pigmentatie, kolonievorm, rand, hoogte,
oppervlak.



Gramkleuring



2

, Principe: Gramkleuring is een methode om bacteriën te onderscheiden op basis van
hun celwand. Gram positieve bacteriën hebben een dikke laag peptidoglycaan in hun
celwand die de kleurstof in de gramstraat goed vast kan houden, hierdoor kleuren gram
positieve bacteriën paars. Gram negatieve bacteriën hebben een minder dikke laag
peptidoglycaan en nog een buitenmembraan om hun celwand waardoor ze de kleurstof
minder goed vast kunnen houden en uiteindelijk roze kleuren.

Materialen:

- Gramstraat
- Timer
- Brander
- 2 Objectglaasjes
- FZ
- Öses
- Houtenknijper
- Filterpapier
- Micrscoop
- Lensolie
- lenscleaner

Methode:

Gramprepraat

1. Maak twee preparaten van morfologisch verschillende bacteriekolonies van je
reinstrijken zoals in het voorbereidingsfilmpje.
2. Beschrijf object glaasje met naam, klas, datum, welke bacterie gebruikt (vanuit
welke plaat). Doe dit met potlood.
3. Doe met öse FZ op het objectglaasje.
4. Pak met nieuwe öse een losliggende bacterie van de reinstrijk. En verspreid het
over het objectglaasje, dit mag best wel breed.
5. Droog de bacterie door hem ver boven de brander te houden. (met de ruisende
vlam), hou de plaat vast met een houten knijper
6. Fixeer hem door het objectglaasje drie keer door de onderkant van de vlam te
doen. (de blauwe kegel)



Gramkleuring

Kleur het preparaat volgens Gram:

1. Kleur de preparaten 90 seconden in kristalviolet
2. Afspoelen met demiwater


3