Caspase-3 ELISA is een betere techniek om
etoposide-geïnduceerde apoptose in Jurkatcellen
aan te tonen dan PARP-Western Blot
Adviesrapport CBO 2022-2023
adviesrapport
Namen: Ilse Verdoes (s1143375), Isabel de Vette (s1141845) en Daan Wildemans (s1142669)
Klas: BM2O
Cursuscode: BT-CEI BV06CBO Gelegenheid 2
Docent: Loes Kuijk
1
, Inleiding
Apoptose is het proces waarin een cel gecontroleerd doodgaat. Cellen ondergaan
apoptose o.a. als ze beschadigd zijn, te oud zijn of niet overgaan tot celdeling.
Tijdens apoptose zal de cel ineenkrimpen en wordt het DNA gefragmenteerd. 1
Apoptose kan worden geïnduceerd door de stof etoposide. Etoposide is een
medicijn dat de werking remt van Topoisomerase II. Dit enzym kan beide DNA-
strengen tegelijk knippen om hiermee verkeerde draaiing (supercoiling) van de
strengen te voorkomen. Als Topoisomerase II geremd wordt, blijven de DNA-
strengen open en is de cel niet in staat tot verdere celdeling. Er zullen
vervolgens signalen van cel schade worden verstuurd en de cel zal overgaan tot
apoptose. Etoposide is een stof die een grote rol speelt bij het genezen van
kanker vanwege zijn effect.
Tijdens dit onderzoek wordt het effect van etoposide op Jurkatcellen nader
bekeken. Jurkatcellen zijn afgeleid van een humane T-lymfocyten
leukemiecellijn.2 Deze zijn dus geschikt om het effect van etoposide op de cellen
van kankerpatiënten te onderzoeken. Het is van belang dat hierbij een techniek
wordt gebruikt die gemakkelijk een specifiek en betrouwbaar resultaat oplevert.
Het resultaat moet kunnen aantonen of etoposide apoptose in (kanker)cellen
induceert. In dit rapport worden de caspase-3 ELISA en de PARP Western Blot
technieken vergeleken met elkaar.
Caspase-3 speelt een belangrijke rol bij apoptose. Als er een signaal aan de cel is
afgegeven om over te gaan tot apoptose, zal caspase-3 gecleaved (gesplitst)
worden, dan is caspase-3 actief.3 Gecleaved caspase-3 kan dus aantonen dat de
cel tot apoptose is overgegaan. Bij het uitvoeren van de caspase-3 ELISA wordt
de hoeveelheid actief caspase-3 gemeten. Dit is een maat voor het aantonen van
celdood.
De andere techniek, PARP Western Blot, is gebaseerd op PARP-1. Dit enzym
wordt gecleaved door caspase-3 in fragmenten van 89 kDa en 24 kDa tijdens
apoptose.4 Gecleaved PARP-1 kan dus ook gebruikt worden om apoptose aan te
tonen. De twee fragmenten van PARP-1 die ontstaan tijdens apoptose, kunnen
vervolgens worden aangetoond met behulp van de Western Blot techniek. Aan
de hand van de grootte van de bandjes die op het membraan te zien zijn, kan
worden onderzocht in hoeverre er sprake is van apoptose.
De bijbehorende onderzoeksvraag luidt: ‘’Is de PARP Western Blot of de caspase-
3 ELISA techniek beter geschikt om etoposide-geïnduceerde apoptose aan te
tonen?’’.
2
etoposide-geïnduceerde apoptose in Jurkatcellen
aan te tonen dan PARP-Western Blot
Adviesrapport CBO 2022-2023
adviesrapport
Namen: Ilse Verdoes (s1143375), Isabel de Vette (s1141845) en Daan Wildemans (s1142669)
Klas: BM2O
Cursuscode: BT-CEI BV06CBO Gelegenheid 2
Docent: Loes Kuijk
1
, Inleiding
Apoptose is het proces waarin een cel gecontroleerd doodgaat. Cellen ondergaan
apoptose o.a. als ze beschadigd zijn, te oud zijn of niet overgaan tot celdeling.
Tijdens apoptose zal de cel ineenkrimpen en wordt het DNA gefragmenteerd. 1
Apoptose kan worden geïnduceerd door de stof etoposide. Etoposide is een
medicijn dat de werking remt van Topoisomerase II. Dit enzym kan beide DNA-
strengen tegelijk knippen om hiermee verkeerde draaiing (supercoiling) van de
strengen te voorkomen. Als Topoisomerase II geremd wordt, blijven de DNA-
strengen open en is de cel niet in staat tot verdere celdeling. Er zullen
vervolgens signalen van cel schade worden verstuurd en de cel zal overgaan tot
apoptose. Etoposide is een stof die een grote rol speelt bij het genezen van
kanker vanwege zijn effect.
Tijdens dit onderzoek wordt het effect van etoposide op Jurkatcellen nader
bekeken. Jurkatcellen zijn afgeleid van een humane T-lymfocyten
leukemiecellijn.2 Deze zijn dus geschikt om het effect van etoposide op de cellen
van kankerpatiënten te onderzoeken. Het is van belang dat hierbij een techniek
wordt gebruikt die gemakkelijk een specifiek en betrouwbaar resultaat oplevert.
Het resultaat moet kunnen aantonen of etoposide apoptose in (kanker)cellen
induceert. In dit rapport worden de caspase-3 ELISA en de PARP Western Blot
technieken vergeleken met elkaar.
Caspase-3 speelt een belangrijke rol bij apoptose. Als er een signaal aan de cel is
afgegeven om over te gaan tot apoptose, zal caspase-3 gecleaved (gesplitst)
worden, dan is caspase-3 actief.3 Gecleaved caspase-3 kan dus aantonen dat de
cel tot apoptose is overgegaan. Bij het uitvoeren van de caspase-3 ELISA wordt
de hoeveelheid actief caspase-3 gemeten. Dit is een maat voor het aantonen van
celdood.
De andere techniek, PARP Western Blot, is gebaseerd op PARP-1. Dit enzym
wordt gecleaved door caspase-3 in fragmenten van 89 kDa en 24 kDa tijdens
apoptose.4 Gecleaved PARP-1 kan dus ook gebruikt worden om apoptose aan te
tonen. De twee fragmenten van PARP-1 die ontstaan tijdens apoptose, kunnen
vervolgens worden aangetoond met behulp van de Western Blot techniek. Aan
de hand van de grootte van de bandjes die op het membraan te zien zijn, kan
worden onderzocht in hoeverre er sprake is van apoptose.
De bijbehorende onderzoeksvraag luidt: ‘’Is de PARP Western Blot of de caspase-
3 ELISA techniek beter geschikt om etoposide-geïnduceerde apoptose aan te
tonen?’’.
2
