samenvatting practica histologie

Practica histologie
1.Histotechnieken: van biopt tot gekleurde
weefselcoupe
 Doel: bewerken van histologische prelevementen (biopten) ten behoeve
van lichtmicroscopisch onderzoek


1.1. Inleiding
 Behandeling om structuren waaruit weefsel of cel bestaat kunnen
differentiëren
 Bestanddelen dienen vastgelegd te worden
 Morfologische cellulaire structuren dienen behouden te blijven



1.2. Fixatie
1.2.1. Doel
 Verschillende chemische bestanddelen + morfologische cellulaire
structuren behouden

1.2.2. Effecten
 Preventie van autolyse en putrefractie
 Lyse van cellen door enzymatische activiteit tgv ruptuur
lysosomen
 Afbraak van weefsel tgv bacteriële activiteit, gepaard met
gasformatie
 Behouden cellen en weefselbestandedelen in zo getrouw
mogelijke toestand
 Harden van weefsel (manipulatie natuurlijk weke weefsels
mogelijk)
 Stijgen brekingsindex componenten zodat het beter
waargenomen wordt
 Beïnvloeding kleurtechnieken  meer selectieve kleuring



1.2.3. Soorten fixatieven
Formaldehyde - In water oplosbaar gas
- Commercieel als formol (40%)
- Meest gebruikt (10%)
- Geïncorporeerd in andere fixatieven
- Door oxidatie ontstaat verzuring met
vorming storende formolpigment
toevoegen fosfaatbuffer
Ethylalcohol - Weinig nut (uitgez. Bloeduitstrijkjes)
- Penetreert traag verharding na lange tijd
- Combinatie met carnoy’s vloeistof versnelt

, - Ethanol denatureert EW, precipiteert
glycogeen en lost vetten op
Aceton - Analoog ethanol
- Glycogeen niet goed bewaard
- Niet routinematig gebruikt
 Combinatie van fixatieven:

Alcoholische - Formol 10 ml
formol - 90% alcohol 90 ml
- Fixatie polysacchariden
- Volledig na 6-8 uur
Carnoy’s - 100% alcohol 60 ml
vloeistof - Chloroform 30 ml
- Azijnzuur 10 ml
- Snelle penetratie
- Goede nucleaire fixatie met preservatie
RER en glycogeen
- Veroorzaakt krimping en vernietigd
cytoplasmatische elementen
- Volledig 1-2 uur of 15 min




1.3. Weefselbewerking
1.3.1. Inleiding
 Snijdbaar maken voor microtoom
 Doordrengen met stof die stevige consistentie geeft
 Inbedding en impregnatie met gelatine  biopsiefragmenten
zoals bot
 Inbedding en impregnatie met paraffine  als regel voor
lichtmicroscopie
 Inbedding in plasticsoorten (harsen)  nog harder, nog fijner
snijden

1.3.2. Paraffine inbedding
 Voorafgegaan door 2 stappen
1. Dehydratatie
 Water uit weefsel halen
 Dmv alcohol reeks
 Serie baden met stijgende alcohol concentraties
(anders te veel krimping)
2. Clearing
 Intermediaire vloeistof die mengbaar is met
paraffine en alcohol
 Ethanol vervangen door derde vloeistof
 Weefselfragment wordt transparant
 Chloroform: duurt lang
 Benzeen: toxisch
 Tolueen en xyleen: kleine fragmenten 30-60 min,
grotere 2-4 uur
vervangmiddel neoclear