Primair artikel 5, genen corticale malformatie, Lena Will
Beginpraatje over de cursurs:
- We gaan een online tentamen doen
- We krijgen haar mobiele nummer voor het geval er iets is bv je bent ziek en wilt dat niet via
email communiceren. Daarnaast kan je het nummer ook gebruiken voor het geval er iets
misgaat bij het tentamen. Der nummer staat op blackboard bij informatie.
Primair artikel over defecten corticale migratie
Belangrijke bevindingen:
- .
Wat is nieuw:
- Ze hebben een hele nieuwe screeningsmethode bedacht om genen te identificeren. Deze
screen heet transposon-gemedieerde somatische mutagenese.
- Doordat ze in utero gebruiken, kan het snel, is het relatief goedkoop en doordat het in utero
gebeurt kan je naar de ontwikkeling kijken van somatische cellen (niet van stamcellen).
- Het is wss in nature gepubliceerd omdat ze heel veel methoden door elkaar gebruiken om
hun bevindingen te bevestigen.
Ze doen forward genetics en normaal wordt dat in dieren gedaan met een korte levenscyclus: gist, C.
elegans, Drosophila etc. Deze hebben een korte reproductietijd en zijn vrij goedkoop te houden.
Normaal wordt dit niet in muizen gedaan, omdat dat niet optimaal is, maar nu is dat dus wel
mogelijk.
Vraag van te voren splinkerette PCR, hoe werkt dat? Dat zullen bij de betreffende figuur bespreken,
want daar zit een extra slide bij om het uit te leggen.
Vraag 1b/c: hoe weet je dat zowel PB als PBase in de cel zit, want PBase heeft geen kleur.
Dat weet je dus niet. Al zullen de cellen die geen transposase bevatten worden echter niet
meegenomen worden in de PCR screen omdat dan gebruik gemaakt wordt van de transposon
sequentie, maar in de afbeelding kan je dus geen onderscheid maken. Ze hadden blauw toe kunnen
voegen aan transposase, dan was het wel mogelijk.
Figuur 1
A. In groen zie je de normale migratie en in het rode gedeelte zie je dat RGCs normaal neuronen
vormen die naar de corticale plaat migreren, maar nu blijven ze hangen in de (S)VZ. Dat komt
omdat hier de random inserties toegepast zijn. Ze hebben de mutanten verkregen middels
PB transposons die op willekeurige plekken worden geïnserteerd. Hiervoor is wel een
transposase nodig, anders lukt het niet (PBase). Deze vorm van PB inserteert een keer en
gaat dan niet hoppen in het DNA. Ze hebben de vectoren aan de ventriculaire kant gekregen
middels in utero elektroporatie (vector in de ventrikel en stroom erop). Bij deling hebben de
nakomelingen dezelfde insertie.
B. Als enkel GFP ingebracht is, zie je dat de migratie normaal verloopt. Rechts zie je dat de
migratie niet goed verloopt als PB en PBase ingebracht worden. Verder is geel de combinatie
van rood en groen (groen de hele cel en rood in de kern). Transposase zelf heeft geen kleur
dus je kan niet bewijzen dat ze ook transposase hebben. De gele bollen bovenin hebben
zowel transposon, transposase als GFP. Toch migreren ze normaal en dan heeft de insertie
dus in een gen plaatsgevonden die niet betrokken is bij de migratie/ontwikkeling.
De onderzoekers gaan ervanuit dat de gele cellen neuronen zijn waarbij de migratie
verstoord (kan) is(/zijn). De rode cellen zijn cellen die wss geen neuronen zijn, want dan
zouden ze geel zijn en daarom migreren ze niet.
Beginpraatje over de cursurs:
- We gaan een online tentamen doen
- We krijgen haar mobiele nummer voor het geval er iets is bv je bent ziek en wilt dat niet via
email communiceren. Daarnaast kan je het nummer ook gebruiken voor het geval er iets
misgaat bij het tentamen. Der nummer staat op blackboard bij informatie.
Primair artikel over defecten corticale migratie
Belangrijke bevindingen:
- .
Wat is nieuw:
- Ze hebben een hele nieuwe screeningsmethode bedacht om genen te identificeren. Deze
screen heet transposon-gemedieerde somatische mutagenese.
- Doordat ze in utero gebruiken, kan het snel, is het relatief goedkoop en doordat het in utero
gebeurt kan je naar de ontwikkeling kijken van somatische cellen (niet van stamcellen).
- Het is wss in nature gepubliceerd omdat ze heel veel methoden door elkaar gebruiken om
hun bevindingen te bevestigen.
Ze doen forward genetics en normaal wordt dat in dieren gedaan met een korte levenscyclus: gist, C.
elegans, Drosophila etc. Deze hebben een korte reproductietijd en zijn vrij goedkoop te houden.
Normaal wordt dit niet in muizen gedaan, omdat dat niet optimaal is, maar nu is dat dus wel
mogelijk.
Vraag van te voren splinkerette PCR, hoe werkt dat? Dat zullen bij de betreffende figuur bespreken,
want daar zit een extra slide bij om het uit te leggen.
Vraag 1b/c: hoe weet je dat zowel PB als PBase in de cel zit, want PBase heeft geen kleur.
Dat weet je dus niet. Al zullen de cellen die geen transposase bevatten worden echter niet
meegenomen worden in de PCR screen omdat dan gebruik gemaakt wordt van de transposon
sequentie, maar in de afbeelding kan je dus geen onderscheid maken. Ze hadden blauw toe kunnen
voegen aan transposase, dan was het wel mogelijk.
Figuur 1
A. In groen zie je de normale migratie en in het rode gedeelte zie je dat RGCs normaal neuronen
vormen die naar de corticale plaat migreren, maar nu blijven ze hangen in de (S)VZ. Dat komt
omdat hier de random inserties toegepast zijn. Ze hebben de mutanten verkregen middels
PB transposons die op willekeurige plekken worden geïnserteerd. Hiervoor is wel een
transposase nodig, anders lukt het niet (PBase). Deze vorm van PB inserteert een keer en
gaat dan niet hoppen in het DNA. Ze hebben de vectoren aan de ventriculaire kant gekregen
middels in utero elektroporatie (vector in de ventrikel en stroom erop). Bij deling hebben de
nakomelingen dezelfde insertie.
B. Als enkel GFP ingebracht is, zie je dat de migratie normaal verloopt. Rechts zie je dat de
migratie niet goed verloopt als PB en PBase ingebracht worden. Verder is geel de combinatie
van rood en groen (groen de hele cel en rood in de kern). Transposase zelf heeft geen kleur
dus je kan niet bewijzen dat ze ook transposase hebben. De gele bollen bovenin hebben
zowel transposon, transposase als GFP. Toch migreren ze normaal en dan heeft de insertie
dus in een gen plaatsgevonden die niet betrokken is bij de migratie/ontwikkeling.
De onderzoekers gaan ervanuit dat de gele cellen neuronen zijn waarbij de migratie
verstoord (kan) is(/zijn). De rode cellen zijn cellen die wss geen neuronen zijn, want dan
zouden ze geel zijn en daarom migreren ze niet.
