Samenvatting test practicum histologie

Histologie practicum samenvatting
- Overzicht van biopt tot gekleurd preparaat
 Fixeren
 Inbedden
 Snijden
 Kleuren
 Beoordelen resultaat
- Biopt = stukje weefsel van een persoon

1. FIXATIE
- Doel
 biopsiefragmenten LM goed kunnen onderzoeken
 vele en complexe structuren cel/weefsel kunnen onderscheiden
 chemische bestanddelen: eiwitten, vetten, koolhydraten en zouten
 morfologische cellulaire structuren behouden
- effecten
 preventie van autolyse en putrefactie
 Autolyse: afbraak cellen door enzymen > lysosomen
 Putrefactie: afbraak t.g.v. bacteriële activiteit, vaak met gasformatie
 behouden van cellen en weefselbestanddelen in zo getrouw mogelijke toestand
 harden van weefsel
 manipulatie van natuurlijke weke weefsel wordt mogelijk
 brekingsindex stijgt cel en weefselcomponenten worden beter waargenomen
 meer selectieve kleuring

ENKELVOUDIGE FIXATIEVEN

- Formaldehyde
 gas, oplosbaar in water 40 % van zijn gewicht
 verzadigde oplossing commercieel verkrijgbaar als formol (40% formaldehyde)
 meest gebruikte fixatief  meestal een 10% formoloplossing
 geïncorporeerd in vele andere fixatieven
 fosfaatbuffer: tegen oxidatie (formolpigment)
 door oxidatie van formaldehyde ontstaat verzuring met vorming van
storend formolpigment  toevoegen fosfaatbuffer
- Ethylalcohol
 alleen: weinig nut, uitz.: bloeduitstrijkjes
 penetreert traag, verharding duurt lang
 samen met andere reagentia zoals Carnoy's vloeistof ®  fixatie sneller
 Effecten:
 denaturatie van eiwitten
 Precipitatie glycogeen
 oplossen vetten
- Aceton: (niet meer gebruikt)
 Werking analoog met ethanol, maar glycogeen niet goed bewaard




COMBINATIE VAN FIXATIEVEN


1

, - Alcoholische formol
 opgebouwd uit:
 formol 10 ml
 90% alcohol 90 ml
 wordt soms gebruikt voor de fixatie van KH
 fixatie volledig na 6 tot 8 uur
- Carnoy’s vloeistof
 samenstelling:
 100% alcohol 60 ml
 chloroform 30 ml
 azijnzuur 10 ml
 snelle penetratie
 zeer goede kernfixatie met bewaring van het RER en glycogeen
 veroorzaakt een belangrijke krimping en vernietigt meeste cytoplasmatische elementen
 fixatie volledig in 1 tot 2 uur
 fragmenten met d= 2 tot 3 mm: fixatie voltooid na 15 minuten
 Bouin: bevat picrinezuur, wordt niet meer gebruikt  vroeger vaak gebruikt maar nu niet
meer

2. Inbedding
- Na fixatie moet weefsel verhard worden om te kunnen snijden
- Soorten inbeddingmiddelen:
 inbedding en impregnatie met gelatine:
 ideaal voor harde biopsiefragmenten, zoals bot
 inbedding en impregnatie met paraffine
 Inbedding in plasticsoorten (harsen)
- Voor de routine lichtmicroscopie wordt als regel paraffine gebruikt

Paraffine inbedding (2 methodes)

- proces voorafgegaan door twee belangrijke stappen:
 dehydratatie
 het water wordt uit de weefselfragmenten gehaald door alcohol reeks
 samengesteld uit een serie baden met stijgende alcohol concentraties
 clearing
 alcohol en paraffine zijn onderling niet mengbaar
 Daarom tussen deze baden: intermediaire vloeistof  wel met beide mengbaar
 ethanol wordt vervangen door deze derde vloeistof
 Wanneer het weefselfragment met een dergelijke stof geïmpregneerd, wordt
het transparant  clearing
 Soorten clearingmiddelen
 chloroform: duurt lang
 benzeen: toxisch
 tolueen en xyleen: worden nog gebruikt voor immunokleuring
o kleine fragmenten “geklaard” in 30’ tot 60’ grotere fragmenten
in 2 tot 4 uur
o techniek is analoog als bij dehydratatie
 Vervangmiddel voor tolueen en xyleen: vb. NEOCLEAR®: meest gebruikt
- impregnatie met vloeibare paraffine (manueel)
 paraffine wordt verwarmd tot enkele graden Celsius boven zijn smeltpunt (60° Celsius)
 het weefsel wordt hier dan ingebracht

2