Résumé Superfiche sur les protéines, leur analyse structurale et leur liaison à l'ADN

🔴
Superfiche interaction protéine
ADN
Méthodes d’analyse :

Chromato d’affinité à l’héparine → Ressemble à l’ADN donc prot avec affinité
pour ADN se fixent dessus puis élution par gradient de sel

Retard sur gel (où on révèle l’ADN ou alors la protéine = 2 approches
différentes)

Séquençage par la méthode Maxam Gilbert → Marquage gamma P32 et clivage
derrière des nt spé (G, A etG, T et C ou C) Puis électrophorèse et radiographie

Séquençage par la méthode de Sanger : On met des ddNTP en qté limitée soit
marqué au P32 (on ajoute 1 ddNTP à la fois) soit marqué par un fluorophore
(couleur diff pour chaque ddNTP)

Empreinte à l’exonucléase : ADN marqué sur 1 extremité → Exonucléase
dégrade de 3’ → 5’ (arrête au niveau de la prot)
On réitère l’exp en marquant l’autre brin → En comparant les électrophorèses on
déduit le site d’intéraction par recoupmt

Empreinte à la DNase I : Conditions ménagées = 1 coupure par molécule d’ADN
puis électrophorèse

Structure de l’ADN :




Superfiche interaction protéine ADN 1

, Lien formé entre 3’ et 5’ mais élongation dans le sens 5’→3’

AT : 2LH GC : 3LH

Longueur grand sillon : 12 A, petit sillon : 6A, pas db hélice : 34A, largeur hélice =
24A

Pas hélice alpha = 5,4A



Compaction de l’ADN chez les eucaryotes :
Octomère d’histone entourés d’ADN = Nucléosome



3 confos d’ADN :

A = forme transitoire (Hélice doite avec pas plus petit)

B = Forme majoritaire (Hélice droite, 10 pb par tour)

Z = Séquence GC à forte [sel] (Hélice gauche avec pas plus grand)



Dans chaque base : sites donneurs et d’autres accepteurs




Superfiche interaction protéine ADN 2