Gevoeligheidsbepalingen
Antibiogram
- Bactericide (=dodend) vermogen
- Dosering van antibiotica in serum
Bactericide = doden de bacterie versus bacteriostatisch = remmen de groei van bacteriën
Gevoeligheid van bacteriën
Biologische gevoeligheid: (MIC)
Duidt aan welke de kleinste concentratie van het antibioticum is die de bacterie kan beletten te
groeien: MINIMALE INHIBERENDE CONCENTRATIE (MIC)
Dilutiemethode
Vloeibaar milieu
- Macrodilutie (in buisjes)
1. Men laat een bacterie-ioculum groeien (37°C/ 18-24 uur) in vloeibare VB (tube) met verschillende
concentraties (duploverdunningen) van het antibioticum → concentratie van antibioticum
uitgedrukt in µg/mL (mg/L)
2. Na incubatie neemt men als MIC: de laagste concentratie van het antibioticum waarbij de groei van
de bacterie volledig geremd wordt (bv. 1 µg/mL)
3. Wanneer men de culturen die geen macroscopische groei vertonen, overent op een vaste
voedingsbodem en opnieuw incubeert op 37°C / 18-24 uur kan men de MBC bepalen
MBC= minimale bactericiede concentratie (bv. 4 µg/mL)
- Microdilutie (in microtiterplaat)
Hetzelfde principe alleen de MIC-bepaling gebeurt in microtiterplaten i.p.v. in buizen
(semi)-automatiseerbaar
, vast milieu
Vereenvoudigde plaatdilutie methode:
- Mueller Hinton agar wordt gesteriliseerd
- na afkoeling tot 56°C worden antibiotica toegevoegd
in verschillende concentraties
waarom na 56°C? anders is de antibiotica al kapot maar hij
moet nog altijd vloeibaar zijn om te kunnen gieten
- na goed mengen worden de voedingsbodems
uitgegoten in petriplaten
- de voedingsbodems worden geënt door radiale
streepentingen, ofwel met een automatische
multipoint inoculator met 25 stempels onder de vorm
van entstippen
Vereenvoudigde plaatdilutie methode:
- als inoculum suspendeert men één kolonie in 0,5 ml TSB die men 3-4
uur incubeert op 37°C, hiervan ent men 1 entlus of 1 druppel
- na incubatie 37°C, 18-24 uur worden de platen afgelezen
MIC= laagste concentratie van het antibioticum waarbij geen groei optreedt
Diffusiemethode
Diskmethode
- Kirby-Bauer methode (papieren schijfjes)
o een bacterie-inoculum worden geënt op een Mueller Hinton agar.
o ronde papieren schijfjes vloeipapier gedrenkt in een antibioticumoplossing
worden op de agar aangebracht
o incubatie 37°C/ 18-24 uur
- Neo-Sensitabs methode (ROSCO tabletjes)
o idem: tabletjes i.p.v. papieren schijfjes
Principe:
- bacterie begint te groeien en vormt zichtbare kolonies
- antibioticum zal oplossen en diffunderen in de agar, hierdoor zal de concentratie
van het antibioticum afnemen naarmate het zich verder verspreidt in de agar
→ gevolg: cirkelvormige inhibitiezones
- de inhibitiediameter is omgekeerd evenredig met het logaritme van de MIC
- voor elk schijfje met een gekende lading antibioticum kan men een regressielijn
bekomen indien verschillende bacterie-stammen worden getest
- de regressielijn is de beste benadering van de relatie tussen MIC en de inhibitiezone, maar is
slechts semikwantitatief
S = gevoelig
I = intermediair
R = resistent
Heteroresistentie = als er kolonies zich in de inhibitiezones bevinden
Antibiogram
- Bactericide (=dodend) vermogen
- Dosering van antibiotica in serum
Bactericide = doden de bacterie versus bacteriostatisch = remmen de groei van bacteriën
Gevoeligheid van bacteriën
Biologische gevoeligheid: (MIC)
Duidt aan welke de kleinste concentratie van het antibioticum is die de bacterie kan beletten te
groeien: MINIMALE INHIBERENDE CONCENTRATIE (MIC)
Dilutiemethode
Vloeibaar milieu
- Macrodilutie (in buisjes)
1. Men laat een bacterie-ioculum groeien (37°C/ 18-24 uur) in vloeibare VB (tube) met verschillende
concentraties (duploverdunningen) van het antibioticum → concentratie van antibioticum
uitgedrukt in µg/mL (mg/L)
2. Na incubatie neemt men als MIC: de laagste concentratie van het antibioticum waarbij de groei van
de bacterie volledig geremd wordt (bv. 1 µg/mL)
3. Wanneer men de culturen die geen macroscopische groei vertonen, overent op een vaste
voedingsbodem en opnieuw incubeert op 37°C / 18-24 uur kan men de MBC bepalen
MBC= minimale bactericiede concentratie (bv. 4 µg/mL)
- Microdilutie (in microtiterplaat)
Hetzelfde principe alleen de MIC-bepaling gebeurt in microtiterplaten i.p.v. in buizen
(semi)-automatiseerbaar
, vast milieu
Vereenvoudigde plaatdilutie methode:
- Mueller Hinton agar wordt gesteriliseerd
- na afkoeling tot 56°C worden antibiotica toegevoegd
in verschillende concentraties
waarom na 56°C? anders is de antibiotica al kapot maar hij
moet nog altijd vloeibaar zijn om te kunnen gieten
- na goed mengen worden de voedingsbodems
uitgegoten in petriplaten
- de voedingsbodems worden geënt door radiale
streepentingen, ofwel met een automatische
multipoint inoculator met 25 stempels onder de vorm
van entstippen
Vereenvoudigde plaatdilutie methode:
- als inoculum suspendeert men één kolonie in 0,5 ml TSB die men 3-4
uur incubeert op 37°C, hiervan ent men 1 entlus of 1 druppel
- na incubatie 37°C, 18-24 uur worden de platen afgelezen
MIC= laagste concentratie van het antibioticum waarbij geen groei optreedt
Diffusiemethode
Diskmethode
- Kirby-Bauer methode (papieren schijfjes)
o een bacterie-inoculum worden geënt op een Mueller Hinton agar.
o ronde papieren schijfjes vloeipapier gedrenkt in een antibioticumoplossing
worden op de agar aangebracht
o incubatie 37°C/ 18-24 uur
- Neo-Sensitabs methode (ROSCO tabletjes)
o idem: tabletjes i.p.v. papieren schijfjes
Principe:
- bacterie begint te groeien en vormt zichtbare kolonies
- antibioticum zal oplossen en diffunderen in de agar, hierdoor zal de concentratie
van het antibioticum afnemen naarmate het zich verder verspreidt in de agar
→ gevolg: cirkelvormige inhibitiezones
- de inhibitiediameter is omgekeerd evenredig met het logaritme van de MIC
- voor elk schijfje met een gekende lading antibioticum kan men een regressielijn
bekomen indien verschillende bacterie-stammen worden getest
- de regressielijn is de beste benadering van de relatie tussen MIC en de inhibitiezone, maar is
slechts semikwantitatief
S = gevoelig
I = intermediair
R = resistent
Heteroresistentie = als er kolonies zich in de inhibitiezones bevinden
