1. Waarom gebeurt de weefselfractionatie bij 0 graden in ijs?
Inhiberen van de enzymen en proteases.
2. Waarom sucrose toevoegen bij het leverweefsel?
Voedingsbodem cellen?
3. Waarom Na dithioniet toevoegen bij de SDH-assay?
Na dithioniet reduceert TTC waardoor we een ijklijn kunnen opstellen.
4. Waarom aceton toevoegen bij de SDH assay?
Aceton zal de neerslag in de proefbuis oplossen waardoor we de OD-bepaling kunnen
uitvoeren.
5. Waarom is het belangrijk het drooggewicht te bepalen?
Zodat we het aantal g weefsel per ml weefselfractie kunnen bepalen.
6. Wat is de kleuromzetting bij colourometrische kleuring?
Kleurloos TTC zal worden gereduceerd tot een rood wateronoplosbaar Formazan.
7. Wat is het nut van de dialyse?
Met de dialyse lossen we de pellets van de precipitatie op en wordt de overmaat aan
ammoniumsulfaat verwijderd.
8. Isoelektrisch punt; wat bindt bij een bepaalde pH?
Bij het isoelektrisch punt is de netto lading van het eiwit 0. Wanneer de pH lager is dan het
pI van het eiwit; netto positieve lading, pH hoger dan het pI van het eiwit, netto negatieve
lading.
9. Waarom verhogen we de concentratie in TE buffer bij ionenuitwisselingschromatografie?
De gebonden eiwitten worden van de kolom geëlueerd door de zoutconcentratie
verhogen.
10. Wat bedoelen we met de AM-pool?
De AM-pool is de fractie met de hoogste LDH activiteit. De combinatie van de eiwit
(mg/ml) en enzym (U/ml)test toont de fractie met de hoogste activiteit (U/mg).
11. Waarom SDS bij SDS-page?
Eiwitten worden gescheiden op basis van hun grootte (molecuulgewicht) indien ze met SDS
worden behandeld.
SDS denatureert eiwitten en geeft een negatieve lading aan de eiwitten in het monster, in
verhouding tot zijn lengte. De gedenatureerde eiwitten worden “staven” van negatieve
ladingswolk met gelijke lading per eenheidslengte.
12. Wat is het verschil tussen SDS-page en agarose elektroforese?
Bij (natieve) elektroforese worden de eiwitten niet gedenatureerd, waardoor de
natuurlijke structuur van de eiwitten wordt behouden. De natieve LD-isoenzyme kit scheidt
de verschillende LDH-isoenzymes op basis van hun mobiliteit in een agarose gel.
13. Waarom voegen we Temed en Amoniumpersulfaaroplossing toe vlak voor het gieten van de
scheidingsgel?
Ze induceren de polymerisatie van de gel.
14. Waarom de geloplossing voorzichtig mengen?
Lucht inhibeert de polymerisatie van acrylamide.
15. Wat is de functie van de ladingsbuffer bij SDS page?
Kleuring en verzwaring van het staal.
16. Waarom concentratie (en pH) verschil tussen scheidings en concentratiegelbuffer?
De concentratiegel zal de eiwitten eerst concentreren zodat ze bij de scheidingsgel correct
kunnen worden gescheiden.
17. Waarom wordt Tween-20 gebruikt bij western blotting (idem magere melkpoeder, BSA)?
Blokeert de aspecifieke bindingsplaatsen op het membraan (voorkomt ruis).
Inhiberen van de enzymen en proteases.
2. Waarom sucrose toevoegen bij het leverweefsel?
Voedingsbodem cellen?
3. Waarom Na dithioniet toevoegen bij de SDH-assay?
Na dithioniet reduceert TTC waardoor we een ijklijn kunnen opstellen.
4. Waarom aceton toevoegen bij de SDH assay?
Aceton zal de neerslag in de proefbuis oplossen waardoor we de OD-bepaling kunnen
uitvoeren.
5. Waarom is het belangrijk het drooggewicht te bepalen?
Zodat we het aantal g weefsel per ml weefselfractie kunnen bepalen.
6. Wat is de kleuromzetting bij colourometrische kleuring?
Kleurloos TTC zal worden gereduceerd tot een rood wateronoplosbaar Formazan.
7. Wat is het nut van de dialyse?
Met de dialyse lossen we de pellets van de precipitatie op en wordt de overmaat aan
ammoniumsulfaat verwijderd.
8. Isoelektrisch punt; wat bindt bij een bepaalde pH?
Bij het isoelektrisch punt is de netto lading van het eiwit 0. Wanneer de pH lager is dan het
pI van het eiwit; netto positieve lading, pH hoger dan het pI van het eiwit, netto negatieve
lading.
9. Waarom verhogen we de concentratie in TE buffer bij ionenuitwisselingschromatografie?
De gebonden eiwitten worden van de kolom geëlueerd door de zoutconcentratie
verhogen.
10. Wat bedoelen we met de AM-pool?
De AM-pool is de fractie met de hoogste LDH activiteit. De combinatie van de eiwit
(mg/ml) en enzym (U/ml)test toont de fractie met de hoogste activiteit (U/mg).
11. Waarom SDS bij SDS-page?
Eiwitten worden gescheiden op basis van hun grootte (molecuulgewicht) indien ze met SDS
worden behandeld.
SDS denatureert eiwitten en geeft een negatieve lading aan de eiwitten in het monster, in
verhouding tot zijn lengte. De gedenatureerde eiwitten worden “staven” van negatieve
ladingswolk met gelijke lading per eenheidslengte.
12. Wat is het verschil tussen SDS-page en agarose elektroforese?
Bij (natieve) elektroforese worden de eiwitten niet gedenatureerd, waardoor de
natuurlijke structuur van de eiwitten wordt behouden. De natieve LD-isoenzyme kit scheidt
de verschillende LDH-isoenzymes op basis van hun mobiliteit in een agarose gel.
13. Waarom voegen we Temed en Amoniumpersulfaaroplossing toe vlak voor het gieten van de
scheidingsgel?
Ze induceren de polymerisatie van de gel.
14. Waarom de geloplossing voorzichtig mengen?
Lucht inhibeert de polymerisatie van acrylamide.
15. Wat is de functie van de ladingsbuffer bij SDS page?
Kleuring en verzwaring van het staal.
16. Waarom concentratie (en pH) verschil tussen scheidings en concentratiegelbuffer?
De concentratiegel zal de eiwitten eerst concentreren zodat ze bij de scheidingsgel correct
kunnen worden gescheiden.
17. Waarom wordt Tween-20 gebruikt bij western blotting (idem magere melkpoeder, BSA)?
Blokeert de aspecifieke bindingsplaatsen op het membraan (voorkomt ruis).
