Labo microbiologie samenvatting

Labo microbiologie

Labo les 1: steriliteit en voedingsmedia

2 basisprincipes microbiologie

 Voedingsbodem
 Steriliteit
1.1 Steriliteit
 Na sterilisatie materiaal beschermen tegen hercontaminaties (lucht,
personen)
 Afsluiten recipiënt en dergelijke
 Katoen proppen ( watten), aluminiumfolie, speciale metalen kapjes,
schroefdoppen
 Voornaamste sterilisatie techniek-> warmte
1.1.1 Sterilisatie droge warmte
 elektrische oven
 Droogsterilisator/ droogoven
 Glas, metaal
 Langzaam wegens lucht een slechte warmte geleider is
 Hogere temperatuur -> duur verkort

180 graden 1/2u Minimum
170 graden 1u Minimum
160 graden 2u Minimum
 Inpakken met kraftpapier
1.1.2 Sterilisatie vochtige warmte
 boven 100°c pas micro-organismen + sporen dood
 Koken onder druk -> autoclaaf
 Lucht verwijderen door uitlaatopening
 Hermetisch afgesloten-> voor druk verhoging
 121°c
 1 atmosfeer druk
 15 min
 Deze temperatuur kan alleen bereikt worden als alleen stoom in de
autoclaaf aanwezig is
 Anders onvoldoende steriel door lage temperatuur
 Voedingsmedia, vloeistoffen, materiaal dat niet droog hoeft te zijn,
bestand tegen 121°c of meer



1.1.3 stappenplan autoclaaf
1. Kies autoclaaf + bijpassend deksel + kijk of er een rooster in
zit

, 2. Breng gedesioniseerd water in de pot ( 1cm boven het niveau
van de rooster, langer autoclaveren? Liefst iets meer water
3. Zet het materiaal stevig in de pot
4. Breng de V- vormige inkeping op het deksel t.o.v de v-vormige
inkeping op de ketel, plaats op deze manier het deksel op de
ketel
5. Draai het deksel toe zodat de handvaten op elkaar staan
6. Laat de uitlaatklep open
7. Verwarmingsplaat op max stand
8. Laat alle lucht uit de ketel ontsnappen (vochtige stoom na een
tijd droge stoom)
9. Sluit de uitlaatklep door de afsluitdop te plaatsen
10. Laat de ketel op de gewenste druk komen (1kg/cm2 of
14-15psi) pas als het druk ventiel omhoog komt begint de
druk te stijgen
11. Bij gewenste druk de verwarming regelen tot de druk
behouden blijft ( even in de gaten houden of de druk blijft)
12. Na vereiste sterilisatie tijd de verwarming afzetten en
laten afkoelen op een rooster -> druk daalt
13. Pas wanneer druk op nul staat en druk ventiel
teruggevallen is afsluitdop afnemen en autoclaaf openen ( let
op! Ontsnappende stoom)
14. Met isolerende handschoenen materiaal eruit nemen en
autoclaaf uitgieten ( geurhinder tegen gaan)
1.2 voedingsbodems
 Medium waarop MO op word gekweekt
Belangrijke ingrediënten voedingsbodem

Grote hoeveelheid water 95-97%
Stikstof (N) bron
Koolstof (C) bron
Vitamines + groeifactoren
Mineralen + sporen elementen
1.2.1 Synthetische voedingsbodem
 zuivere scheikundige verbindingen (nauwkeurig gekend)
 Behoefte MO voor bepaalde voedingstoffen bestuderen
 Gevoeligheid voor stoffen bestuderen
1.2.2 Niet synthetische voedinsgbodem
 Plantaardige of dierlijke verbindingen
 Niet nauwkeurig gekend
 ( vleesextract, gistextract, pepton)
Volgens aard van gebruik onderscheid voedingsbodem
Selectieve voedingsbodems

,  Bevatten stoffen die sommige bacteriën laten groeien en andere
remmen
 Vb: remmen vaak gram positieve bacteriën

Differentiëringsbodems

 Maken onderscheid tussen bacteriën door verschil in kolonie-kleur of
reactie
 Vb: onderscheid tussen E.coli en aerobacter aerogenes

Ophoping of aanrijkingsbodems

 Worden gebruikt om één bacteriesoort te laten toenemen wanneer
die weinig aanwezig is
 Vb: opsporen van salmonella

Telbodems

 Laten zoveel mogelijk MO groeien om hun aantal te bepalen
 Vb: gebruik bij water, melk onderzoek enz.

Vloeibare voedingsbodems

 Bouillions (broth)
 Vb: nutriënten bouililion (NB)
 Geen opstijvende stof -> blijft vloeibaar

Vaste voedingsbodems

 Zelfde samenstelling maar met een opstijvende stof
 Word vast bij afkoelen
 Opstijvende stoffen: agar, gelatine, silicagel

Agar

 Afkomstig van zeewieren
 Bestaat uit polysachariden
 Word door meeste MO niet afgebroken
 Smelt bij +- 100°c en weer vast bij +- 47°c
 Word gebruikt om vaste voedingsbodem te maken
 Bij +- 50°c kan men MO of warmtegevoelige stoffen toevoegen

Manier van opstijven (in proefbuizen)

 Rechte voedingsbodem: groei van facultatief en strikt anaerobe MO
 Schuine voedingsbodem: groei van aerobe MO



1.2.3 Voedingsbodems gebruikt tijdens labosessies

NB Nutrient bouillion Algemeen vloeibaar