Samenvatting Practicum farmaceutische microbiologie

Practicum farmaceutische microbiologie
1. Veiligheid

1.1 Veiligheidsmaatregelen

 Niet eten of drinken in het labo, ook geen kauwgom
 Labojas verplicht
 Géén handschoenen dragen (vals gevoel van veiligheid)
 Handen wassen (wanneer je binnen EN buiten gaat!)
 Tafel VOORAF en ACHTERAF ontsmetten met desinfectie-oplossing
 Zo weinig mogelijk materiaal op tafel
 Besmet materiaal desinfecteren en correct verwijderen
 Ramen en deuren altijd gesloten houden
 Groepsnummer altijd vermelden
 Verwondingen direct melden
 Noodnummer: 6666



1.2 Afval




2. Basismateriaal

2.1 Voedingsmedia voor bacteriën

 Bouillon: vloeibaar
 Agarplaat: vast
o Omgekeerd incuberen!
o Condensatie voorkomen
o Kan een druppel op vallen
 Schuine agar: vast
o Traag groeiende bacteriën



2.2 Geen exacte afmetingen

,  Entogen
o Methode van de vijfhoek
o Oppikken van kolonies
o Als metaal: steriel na afvlammen
o Als plastiek: steriel verpakt
o Bacteriën verdunnen
 Pasteurpipetten
o Enten (= bacteriën aanbrengen) op agar
o Afbuigen in de vlam voor homogeen verspreiden op agar
o 1 druppel = +- 50 µl
o Glas: steriel in doos



2.3 Exacte afmetingen

 Gegradueerde pipetten
o Solvent van verdunningsreeks voor concentratiebepaling
o Proef osmotische druk
o Plastiek + wegwerp: steriel in verpakking
o Te gebruiken met pipet controller
o 1 – 5 ml
 Micropipetten
o Kleine exacte volumes
 20 – 200 µl
 100 – 1000 µl
o Maken van verdunningsreeksen
o Wegwerptip
o Twee weerstanden
 Bunsenbrander
o Gasknop uitschakelen!
o Stekker NIET uittrekken

, 3. Basistechnieken

3.1 Beënten van een agarplaat

 Doel:
o Bacteriën isoleren uit een patiëntenstaal
o Bepalen reincultuur of mengcultuur
 Methode van de vijfhoek
o Controleren op meng- of reincultuur
o 1 kolonie uitselecteren voor verdere proeven
o Entoog afvlammen tussen 2 zijden
 Homogeen beënten
o Bacteriën zo ver mogelijk van elkaar verwijderen (overal evenveel
bacteriën)
o Omgebogen pasteurpipet/L-spreider
o Plaattelling (concentratiebepaling)
o Druppel op agar en dan met L-spreider cirkelbeweging maken



3.2 Concentratiebepaling

 Doel:
o Aantal bacteriën in staal bepalen
 Plaattelling (= CFU-telling)
o 1 levende kiem op een agarplaat => 1 kolonie na incubatie = 1 colony
forming unit (= CFU)
o Op basis van het aantal getelde kolonies kan je het kiemgetal bepalen
(CFU/ml)
o Groot aantal bacteriën: verdunningsreeks
 Significant bij 10 – 100 CFU/halve plaat
 Significant bij 20 – 200 CFU/hele plaat
 Hieronder: statistische fout te groot
 Hierboven: kolonies vloeien samen in elkaar
 Berekenen hoeveel CFU in oorspronkelijke staal zaten




 Confluent = overgroeid
 Links: geen onderscheidt mogelijk
 Rechts: te weinig kolonies