TÉCNICAS DE ADN RECOMBINANTE:
María Arnal Guardia
TÉCNICAS APLICABLES: Existen enzimas de restricción (restrictasas) generalmente las más usadas son de tipo II. Las
enzimas de restricción tipo II reconocen y cortan secuencias específicas del ADN, sin usar
1. Técnicas de ADN recombinantes (cortar, empalmar y clonar). ATP, suelen necesitar magnesio y solo tienen función de "tijera molecular".que reconocen
2. Técnicas de separación (ELECTROFORESIS). una secuencia de ADN característica y cortan en puntos específicos esa secuencia. Estos
3. Técnicas de copia o extensión (PCR). puntos se llaman “sitio” o “diana”, también pueden cortar en un sitio no muy lejano a este.
4. Técnicas de hibridación (southern blot/northern blot). Varían en el número de pares de bases; normalmente entre 4 y 8, aunque pueden llegar a 19.
5. Marcaje con fluoróforos.
FUNCIÓN: Digerir ADN exógeno a través de la ruptura de dos enlaces fosfodiéster en una
GENOTECAS: Una genoteca es una colección organizada de fragmentos de ADN que se ha secuencia de nucleótidos corta. Hay varios tipos de corte:
clonado en vectores para poder conservarlos, estudiarlos o usarlos más fácilmente en el
laboratorio. Hay de dos tipos:
- Genoteca genómica: Son colecciones de fragmentos de TODO el ADN de un
organismo (incluyen genes, intrones, promotores, regiones no codificantes... ¡todo!).
- Genoteca cDNA: Son colecciones de ADN copiado a partir de mRNA.
Solo contienen los genes que se están expresando (es decir, sin intrones ni partes
no codificantes).
ELECTROFORESIS → Permite separar fragmentos de ADN según su tamaño, con
electricidad. Las + pequeñas se van arriba y las más grandes se quedan abajo.
Electro- = flujo de electricidad, -foresis = llevar a través
Las partículas cargadas incluyen DNA, aminoácidos, polipéptidos, etc.
El soporte, normalmente es un gel. Un gel es un coloide, una suspensión de pequeñas TÉCNICAS DE COPIA/EXTENSIÓN (PCR):
partículas en un medio, que se presentan en una forma sólida (como una gelatina) Por
tanto…la electroforesis en gel separa partículas cargadas situadas en un gel al aplicar Reacción en Cadena de la Polimerasa
una corriente eléctrica.
Es una técnica para copiar muchas veces
una región específica del ADN de forma
rápida y en laboratorio (in vitro).
Inventor:
• Kary Mullis (1983) – Premio
Nobel en 1993.
¿Qué hace?
• Copia una secuencia de ADN
muchas veces usando ciclos
térmicos.
• Cada copia sirve como molde para
la siguiente → amplificación
exponencial.
María Arnal Guardia
TÉCNICAS APLICABLES: Existen enzimas de restricción (restrictasas) generalmente las más usadas son de tipo II. Las
enzimas de restricción tipo II reconocen y cortan secuencias específicas del ADN, sin usar
1. Técnicas de ADN recombinantes (cortar, empalmar y clonar). ATP, suelen necesitar magnesio y solo tienen función de "tijera molecular".que reconocen
2. Técnicas de separación (ELECTROFORESIS). una secuencia de ADN característica y cortan en puntos específicos esa secuencia. Estos
3. Técnicas de copia o extensión (PCR). puntos se llaman “sitio” o “diana”, también pueden cortar en un sitio no muy lejano a este.
4. Técnicas de hibridación (southern blot/northern blot). Varían en el número de pares de bases; normalmente entre 4 y 8, aunque pueden llegar a 19.
5. Marcaje con fluoróforos.
FUNCIÓN: Digerir ADN exógeno a través de la ruptura de dos enlaces fosfodiéster en una
GENOTECAS: Una genoteca es una colección organizada de fragmentos de ADN que se ha secuencia de nucleótidos corta. Hay varios tipos de corte:
clonado en vectores para poder conservarlos, estudiarlos o usarlos más fácilmente en el
laboratorio. Hay de dos tipos:
- Genoteca genómica: Son colecciones de fragmentos de TODO el ADN de un
organismo (incluyen genes, intrones, promotores, regiones no codificantes... ¡todo!).
- Genoteca cDNA: Son colecciones de ADN copiado a partir de mRNA.
Solo contienen los genes que se están expresando (es decir, sin intrones ni partes
no codificantes).
ELECTROFORESIS → Permite separar fragmentos de ADN según su tamaño, con
electricidad. Las + pequeñas se van arriba y las más grandes se quedan abajo.
Electro- = flujo de electricidad, -foresis = llevar a través
Las partículas cargadas incluyen DNA, aminoácidos, polipéptidos, etc.
El soporte, normalmente es un gel. Un gel es un coloide, una suspensión de pequeñas TÉCNICAS DE COPIA/EXTENSIÓN (PCR):
partículas en un medio, que se presentan en una forma sólida (como una gelatina) Por
tanto…la electroforesis en gel separa partículas cargadas situadas en un gel al aplicar Reacción en Cadena de la Polimerasa
una corriente eléctrica.
Es una técnica para copiar muchas veces
una región específica del ADN de forma
rápida y en laboratorio (in vitro).
Inventor:
• Kary Mullis (1983) – Premio
Nobel en 1993.
¿Qué hace?
• Copia una secuencia de ADN
muchas veces usando ciclos
térmicos.
• Cada copia sirve como molde para
la siguiente → amplificación
exponencial.
