RESÚMENES GENÉTICA María Arnal Guardia 2º Ingeniería Agroalimentaria
ELECTROFORESIS Y SECUENCIACIÓN DE SANGER
La electroforesis es una técnica que separa fragmentos de ADN y cadenas de ARN de distinto tamaño.
En función de su tamaño y carga eléctrica, se usa una corriente eléctrica para mover las moléculas a
través de un gel que actúa como un tamiz que hace que las moléculas más pequeñas se muevan más
rápido que las grandes. Para determinar el tamaño de la molécula, se usan estándares de tamaños
conocidos, y después se comparan.
Si dos moléculas de la misma masa y forma aproximadamente, la que tenga una mayor carga neta,
migrará más rápidamente hacia el electrodo de polaridad opuesta.
En general la electroforesis separa las moléculas de una mezcla haciéndolas migrar bajo la influencia de
un campo eléctrico. Se coloca la muestra en una sustancia porosa (un trozo de papel de filtro o un gel
semisólido de agarosa), que a su vez se coloca en una solución conductora de electricidad. Sin embargo,
el uso de medios porosos como los geles de poliacrilamida o los geles de agarosa, que pueden prepararse
con distinto tamaño de poro, permite que estas dos moléculas se separen.
En estos casos, las moléculas más pequeñas migran a través del gel a una velocidad mayor que las más
grandes. La clave de la separación está en la matriz (los poros) del gel, que restringe más la migración de
las moléculas gran des que la migración de las moléculas pequeñas. El poder de resolución es tan grande
que pueden separarse con claridad polinucleótidos que se diferencian por un solo nucleótido de
longitud. Cuando finaliza la electroforesis, las bandas de las moléculas de distinto tamaño se identifican
por autorradiografía (si uno de los componentes de la molécula es radioactivo), o mediante un colorante
fluorescente que se une a los ácidos nucleicos.
, RESÚMENES GENÉTICA María Arnal Guardia 2º Ingeniería Agroalimentaria
Una de las metodologías para determinar la secuencia nucleotídica más conocidas es la SECUENCIACIÓN
DE SANGER. Se trata de un proceso de replicación del ADN.
Para Watson y Crick, estaba claro que, debido a la ordenación y naturaleza de las bases nitrogenadas,
cada cadena de DNA de la doble hélice podía servir de molde para la síntesis de su complementaria.
Propusieron que, si la hélice se desenrollase, cada nucleótido a lo largo de las dos cadenas parentales
tendría afinidad por su nucleótido complementario. Cada molécula de DNA replicada consistiría en una
cadena «vieja» y una cadena «nueva»; he ahí la razón para el nombre de replicación semiconservativa.
Hay otras dos posibles formas de replicación que también se basan en las cadenas parentales como
moldes. En la replicación conservativa, la síntesis de las cadenas polinucleotídicas complementarias se
produciría como se ha descrito anteriormente. Después de la síntesis, sin embargo, las dos cadenas
recién creadas se juntarían, y las cadenas parentales se reasociarían. Así se «conservaría» la hélice
original. En la segunda forma alternativa, denominada replicación dispersiva, las cadenas parentales se
dispersarían entre las dos nuevas dobles hélices después después de la replicación. De este modo, cada
cadena estaría formada por DNA viejo y nuevo.
METODOLOGÍA DE SANGER:
El método de secuenciación de Sanger se basa en la acción de las ADN
polimerasas. Estas enzimas tan importantes para nuestras células son
capaces de unirse a una cadena de ADN a la que se le haya unido un
fragmento corto de ADN complementario (cebador) previamente e ir
añadiendo nucleótidos. De este modo, a partir de una cadena simple,
podemos obtener una doble cadena. Este proceso que ocurre de
forma natural en nuestras células es el que ocurre también en la
secuenciación de Sanger, salvo por un ingenioso detalle: la presencia
de didesoxinucleótidos. Cuando una polimerasa inserta un
didesoxinucleótido, la síntesis de la nueva cadena se detiene .
¿Qué se necesita para el método de Sanger?
ELECTROFORESIS Y SECUENCIACIÓN DE SANGER
La electroforesis es una técnica que separa fragmentos de ADN y cadenas de ARN de distinto tamaño.
En función de su tamaño y carga eléctrica, se usa una corriente eléctrica para mover las moléculas a
través de un gel que actúa como un tamiz que hace que las moléculas más pequeñas se muevan más
rápido que las grandes. Para determinar el tamaño de la molécula, se usan estándares de tamaños
conocidos, y después se comparan.
Si dos moléculas de la misma masa y forma aproximadamente, la que tenga una mayor carga neta,
migrará más rápidamente hacia el electrodo de polaridad opuesta.
En general la electroforesis separa las moléculas de una mezcla haciéndolas migrar bajo la influencia de
un campo eléctrico. Se coloca la muestra en una sustancia porosa (un trozo de papel de filtro o un gel
semisólido de agarosa), que a su vez se coloca en una solución conductora de electricidad. Sin embargo,
el uso de medios porosos como los geles de poliacrilamida o los geles de agarosa, que pueden prepararse
con distinto tamaño de poro, permite que estas dos moléculas se separen.
En estos casos, las moléculas más pequeñas migran a través del gel a una velocidad mayor que las más
grandes. La clave de la separación está en la matriz (los poros) del gel, que restringe más la migración de
las moléculas gran des que la migración de las moléculas pequeñas. El poder de resolución es tan grande
que pueden separarse con claridad polinucleótidos que se diferencian por un solo nucleótido de
longitud. Cuando finaliza la electroforesis, las bandas de las moléculas de distinto tamaño se identifican
por autorradiografía (si uno de los componentes de la molécula es radioactivo), o mediante un colorante
fluorescente que se une a los ácidos nucleicos.
, RESÚMENES GENÉTICA María Arnal Guardia 2º Ingeniería Agroalimentaria
Una de las metodologías para determinar la secuencia nucleotídica más conocidas es la SECUENCIACIÓN
DE SANGER. Se trata de un proceso de replicación del ADN.
Para Watson y Crick, estaba claro que, debido a la ordenación y naturaleza de las bases nitrogenadas,
cada cadena de DNA de la doble hélice podía servir de molde para la síntesis de su complementaria.
Propusieron que, si la hélice se desenrollase, cada nucleótido a lo largo de las dos cadenas parentales
tendría afinidad por su nucleótido complementario. Cada molécula de DNA replicada consistiría en una
cadena «vieja» y una cadena «nueva»; he ahí la razón para el nombre de replicación semiconservativa.
Hay otras dos posibles formas de replicación que también se basan en las cadenas parentales como
moldes. En la replicación conservativa, la síntesis de las cadenas polinucleotídicas complementarias se
produciría como se ha descrito anteriormente. Después de la síntesis, sin embargo, las dos cadenas
recién creadas se juntarían, y las cadenas parentales se reasociarían. Así se «conservaría» la hélice
original. En la segunda forma alternativa, denominada replicación dispersiva, las cadenas parentales se
dispersarían entre las dos nuevas dobles hélices después después de la replicación. De este modo, cada
cadena estaría formada por DNA viejo y nuevo.
METODOLOGÍA DE SANGER:
El método de secuenciación de Sanger se basa en la acción de las ADN
polimerasas. Estas enzimas tan importantes para nuestras células son
capaces de unirse a una cadena de ADN a la que se le haya unido un
fragmento corto de ADN complementario (cebador) previamente e ir
añadiendo nucleótidos. De este modo, a partir de una cadena simple,
podemos obtener una doble cadena. Este proceso que ocurre de
forma natural en nuestras células es el que ocurre también en la
secuenciación de Sanger, salvo por un ingenioso detalle: la presencia
de didesoxinucleótidos. Cuando una polimerasa inserta un
didesoxinucleótido, la síntesis de la nueva cadena se detiene .
¿Qué se necesita para el método de Sanger?
