Flow cytometrie
Examenvragen :
• Je begrijpt het analyse- en sorteringsprincipe van een multilaser flowcytometer
• Je begrijpt en kan een overzicht geven van de belangrijkste toepassingen van
flowcytometrie in de diagnostiek en in biomedisch onderzoek
• Definieer de term flowcytometrie
• Beschrijf welk type biologisch staal het meest geschikt is voor een flowcytometriche analyse
• Beschrijf welke kenmerken van een cel of partikel door een flowcytometer kunnen gemeten
worden (= optische vingerafdruk)
• Identificeer de 3 componenten (= hoofdonderdelen) van een flowcytometer (fluidica, optica
en electronica) en beschrijf hun respectievelijke functies
• Verklaar hydrodynamische focusering
• Beschrijf hoe lichtverstrooiing beinvloed wordt door de kenmerken van een cel of partikel
• Beschrijf elastische en niet-elastische lichtverstrooiing
• Beschrijf het gebruik van excitatie- en emissiespectra
• Herken verschillende manieren om flowcytometrische data voor te stellen
Klinische casus:
• 14-jarige jongen
• 10 dagen koorts, bleek in het aangezicht, algemene zwakte, diffuse erythema
• Klinisch onderzoek: splenomegalie (vergroting van de mild)
• Bloedstaal nemen: hemoglobine is normaal, witte BC normaal verdeeld en aantal
Actieve, opgeblazen cellen -> maligniteit
Heb je te maken met maligne cellen? Beste behandeling?
Met flowcytometer inzoomen op elke cel individueel
Elke cel brengt eiwitten op membraan tot expressie -> CD nummers
CD19 -> merker voor B-cel
CD34 -> voorloper hematopoetische stamcellen
flow cytometer: dot plot
1
, elke dot = 1 cel
Resultaat: jongen heeft acute lymfoïde leukemie
Flow cytometry jargon
PARAMETER
Een fysisch of chemisch kenmerk van een cel
o Cytoplasmatische korrelgrootte of kern-DNA-gehalte
Een fysische eigenschap, gemeten door een sensor
o Lichtverstrooiing of fluorescentie
Een fysische eigenschap van een cel-geassocieerd reagens
o Intrinsiek
o Extrinsiek, afhankelijk van de vraag of de eigenschap al dan niet kan worden
gemeten met behulp van sondes
Excitatie Proces waarbij E geabsorbeerd wordt
Exctincit coëfficiënt Effeciëntie waarmee opstische E geabsorbeerd wordt, afhankelijk van
(e) golflengte
Emissie Proces waarbij optische E terug vrijgesteld wordt
Quantum opbrengst Efficiëntie waarmee E wordt vrijgesteld (0-1), meestal als fluorescentie
(Q) Onafhankelijk van golflengte
Stokes shift Verschil in E tussen excitatie max en emissie max
Spectrum Verdeling van excitatie en emissie golflengtes
Flow cytometrie
-> cellen meten in vloeistof flow
-> meten van lichtsignalen
metrie : detectie van lichtsignalen, opgewekt ten gevolge van de
snelle doorgang
cyto : van afzonderlijke cellen doorheen het centrum van een, tot
een microscopisch kleine spot gefocuseerde lichtstraal
flow : wat mogelijk is door de hydrodynamische focusering van de
celsuspensiestroom in een laminaire geleidingsvloeistofstroom
2
Examenvragen :
• Je begrijpt het analyse- en sorteringsprincipe van een multilaser flowcytometer
• Je begrijpt en kan een overzicht geven van de belangrijkste toepassingen van
flowcytometrie in de diagnostiek en in biomedisch onderzoek
• Definieer de term flowcytometrie
• Beschrijf welk type biologisch staal het meest geschikt is voor een flowcytometriche analyse
• Beschrijf welke kenmerken van een cel of partikel door een flowcytometer kunnen gemeten
worden (= optische vingerafdruk)
• Identificeer de 3 componenten (= hoofdonderdelen) van een flowcytometer (fluidica, optica
en electronica) en beschrijf hun respectievelijke functies
• Verklaar hydrodynamische focusering
• Beschrijf hoe lichtverstrooiing beinvloed wordt door de kenmerken van een cel of partikel
• Beschrijf elastische en niet-elastische lichtverstrooiing
• Beschrijf het gebruik van excitatie- en emissiespectra
• Herken verschillende manieren om flowcytometrische data voor te stellen
Klinische casus:
• 14-jarige jongen
• 10 dagen koorts, bleek in het aangezicht, algemene zwakte, diffuse erythema
• Klinisch onderzoek: splenomegalie (vergroting van de mild)
• Bloedstaal nemen: hemoglobine is normaal, witte BC normaal verdeeld en aantal
Actieve, opgeblazen cellen -> maligniteit
Heb je te maken met maligne cellen? Beste behandeling?
Met flowcytometer inzoomen op elke cel individueel
Elke cel brengt eiwitten op membraan tot expressie -> CD nummers
CD19 -> merker voor B-cel
CD34 -> voorloper hematopoetische stamcellen
flow cytometer: dot plot
1
, elke dot = 1 cel
Resultaat: jongen heeft acute lymfoïde leukemie
Flow cytometry jargon
PARAMETER
Een fysisch of chemisch kenmerk van een cel
o Cytoplasmatische korrelgrootte of kern-DNA-gehalte
Een fysische eigenschap, gemeten door een sensor
o Lichtverstrooiing of fluorescentie
Een fysische eigenschap van een cel-geassocieerd reagens
o Intrinsiek
o Extrinsiek, afhankelijk van de vraag of de eigenschap al dan niet kan worden
gemeten met behulp van sondes
Excitatie Proces waarbij E geabsorbeerd wordt
Exctincit coëfficiënt Effeciëntie waarmee opstische E geabsorbeerd wordt, afhankelijk van
(e) golflengte
Emissie Proces waarbij optische E terug vrijgesteld wordt
Quantum opbrengst Efficiëntie waarmee E wordt vrijgesteld (0-1), meestal als fluorescentie
(Q) Onafhankelijk van golflengte
Stokes shift Verschil in E tussen excitatie max en emissie max
Spectrum Verdeling van excitatie en emissie golflengtes
Flow cytometrie
-> cellen meten in vloeistof flow
-> meten van lichtsignalen
metrie : detectie van lichtsignalen, opgewekt ten gevolge van de
snelle doorgang
cyto : van afzonderlijke cellen doorheen het centrum van een, tot
een microscopisch kleine spot gefocuseerde lichtstraal
flow : wat mogelijk is door de hydrodynamische focusering van de
celsuspensiestroom in een laminaire geleidingsvloeistofstroom
2
